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目的:通过结扎大鼠右侧颈总动脉方法制备MCI模型,用相应药物处理5周之后,观察各组模型大鼠的行为学表现,并测定该模型大鼠皮质中NO含量和TNOS活力。通过与其他各组相关指标的对比,评价加味涤痰汤对MCI模型大鼠学习记忆能力的影响。方法:1.大鼠分组及模型制备2月龄SPF级SD大鼠60只,雌雄各半,采用随机分组法分为5组,即空白组、模型组、假手术组、加味涤痰汤组、尼莫地平组,每组12只。除空白组外,其余各组采用结扎右侧颈总动脉方法制备MCI模型,其中假手术组仅寻找到右侧颈总动脉但不予结扎。加味涤痰汤组、尼莫地平组于第5周开始灌胃给药,余下三组生理盐水灌胃。灌胃5周后开始行相关指标检测。加味涤痰汤组方(天南星10g、丹参10g、川芎10g、石菖蒲6g、法夏10g、甘草6g、人参6g、枳实10g、茯苓15g、橘红10g、竹茹10g、生姜5g)。2.各组大鼠行为学检测Morris水迷宫定位航行实验:将Morris水迷宫分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四个象限,将大鼠面向池壁从第一象限投放入水中,记录其在限定时间(2分钟)之内找到平台所用的时间(逃避潜伏期)。历时5天,每日2次(其中前4天为训练期,第5天为检测期)。Morris水迷宫空间探索实验:定位航行检测结束后,将Morris水迷宫中的平台移出,仍然与定位航行训练相同入水点将大鼠投放入水中,记录其在限定时间(2分钟)内游行轨迹,观察大鼠跨越原放置平台位置次数、靠近平台区域时间。历时4天,每日2次(其中前3天为训练期,第4天为检测期)。物体识别实验:训练期间测试箱内放入A套物体,将大鼠放于两物体之间等间距处,迅速关好测试箱,记录大鼠在每个物体上探索的时间(大鼠用鼻子接触物体,或大鼠鼻尖距离物体1cm范围内,如果大鼠趴在物体上或者仅仅在物体1cm之外处游走则不计入)。测试期内,将测试箱内其中一个物体拿走,原位置处放入B套中的一个物体,大鼠放入方法同前,记录大鼠探求新鲜物体和熟悉物体的时间。记录第四天大鼠总探求时间,第五天为检测期,记录大鼠探求新鲜物体所花时间(N)和探求熟悉物体所花时间(F),并依据公式计算辨别指数(discrimination index, DI)。3.大鼠皮质中NO含量和TNOS活力检测:行为学检测结束后,断头处死各组大鼠,将鼠头放置于冰盘上,逐层剥离出海马和皮质,再分别取出海马和皮质,置于不同标记的EP管内,迅速投于液氮瓶中暂存,之后转移至一80℃冰箱中保存待检。检测时,取适量的皮质,用9倍于该量的生理盐水研磨,然后将研磨液置于台式离心机中以3000转/分速度离心10分钟,吸取上清液,放在4℃冰箱保存待检。再严格按照南京建成生物工程研究所提供的一氧化氮和一氧化氮合酶试剂盒检测方法检测皮质中的NO含量及TNOS活力。结果:1.Morris水迷宫检测,比较各组大鼠平均逃避潜伏期、撤掉平台后跨越原来平台位置次数。其中模型组与空白组比较,模型组大鼠平均逃避潜伏期时间较空白组延长,跨越原平台位置次数较空白组较少,其差异性有统计学意义(P<0.05)。模型组与假手术组比较,虽然假手术组大鼠逃避潜伏期时间较模型组缩短,跨越原平台位置次数较模型组增多,但二者差异性不具有统计学意义(P>0.05)。加味涤痰汤组与模型组比较,虽然加味涤痰汤组大鼠逃避潜伏期时间较模型组缩短,跨越原平台位置次数较模型组增多,但二者差异性不具有统计学意义(P>0.05)。加味涤痰汤组与尼莫地平组比较,虽然加味涤痰汤组大鼠平均逃避潜伏期、撤掉平台后跨越原来平台位置次数方面有改善趋势,但其差异性不显著,没有统计学意义(P>0.05)。2.在物体识别检测中,其中模型组与空白组比较,模型组大鼠对新旧物体的辨别指数较空白组下降、总探求时间缩短,其差异性有统计学意义(P<0.05)。模型组与假手术组比较,虽然假手术组大鼠对新旧物体的辨别指数较模型组上升、总探求时间延长,但二者差异性不具有统计学意义(P>0.05)。加味涤痰汤组与模型组比较,加味涤痰汤组大鼠总探求时间较模型组延长、对新旧物体的辨别指数上升,二者差异性具有统计学意义(P<0.05)。加味涤痰汤组与尼莫地平组比较,虽然加味涤痰汤组大鼠对新旧物体的辨别指数上升、总探求时间延长,但其差异性不显著,没有统计学意义(P>0.05)。3.对各组大鼠皮质中NO含量、TNOS活力检测结果显示:其中模型组与空白组比较,模型组大鼠皮质中NO含量和TNOS活力较空白组升高,其差异性有统计学意义(P<0.05)。模型组与假手术组比较,假手术组大鼠皮质中NO含量和TNOS活力较空白组降低,其差异性有统计学意义(P<0.05)。加味涤痰汤组与模型组比较,加味涤痰汤组大鼠皮质中NO含量和T NOS活力较空白组降低,二者差异性具有统计学意义(P<0.05)。加味涤痰汤组与尼莫地平组比较,二组大鼠皮质中NO含量和TNOS活力无显著性差异,不具有统计学意义(P>0.05)。结论:本实验通过结扎右侧颈总动脉方法制备了McI大鼠模型,灌胃给药5周检测相关指标。通过对比观察加味涤痰汤对MCI模型大鼠行为学及皮质中NO含量和TNOS活力影响的研究,发现加味涤痰汤可以缩短McI模型大鼠平均逃避潜伏时间、增加大鼠跨越原平台位置次数、降低大鼠皮质中NO含量及TNOS活力,起到有效保护大脑神经细胞,从而改善McI模型大鼠的空间记忆能力,发挥阻滞或延缓学习记忆能力减退进程效应。说明加味涤痰汤对McI模型大鼠的学习记忆功能有改善作用。