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[目的]趋化因子在非小细胞肺癌发生发展中的作用日益受到关注,作为其中的一员,CCL19能够通过与其受体CCR7结合促进肺癌侵袭转移,但其具体机制尚不明确。本实验采用芯片杂交技术筛选CCL19刺激后差异表达的miRNA,从miRNA角度探索CCL19促进肺癌细胞侵袭转移的分子机制,为非小细胞肺癌的诊疗提供新的生物学指标和潜在靶点。[方法](1)细胞培养:F12培养基常规培养人肺腺癌细胞A549。(2)差异表达miRNA的筛选:A549细胞经400ng/ml CCL19因子处理12小时,收获细胞,提取细胞总RNA,ExiqonmiRNA芯片杂交,与未经CCL19因子处理的A549细胞对照,筛选差异表达的miRNA,并行q-PCR验证。starBase和TargetScan数据库预测相关差异miRNA的靶基因。选择差异表达明显的miR-493-5p进行后续研究。(3)稳转细胞株的构建:以LV-hsa-mir-493-5p(42841-1)病毒和GV309载体(元件顺序 hU6-MCS-Ubiquitin-EGFP-IRES-puromycin)构建慢病毒表达载体,转染A549细胞,并通过嘌呤霉素筛选,获得稳定过表达miR-493-5p的稳转细胞株 LV-has-miR-493-5p-A549 和阴性对照细胞 LV-NC-A549。(4)免疫蛋白印迹检测 E-cadherin、N-cadherin、Snail、c-Met 和 AKT 蛋白的表达。(5)划痕实验和Transwell实验检测肺癌细胞A549的迁移和侵袭能力。(6)非小细胞肺癌临床组织样本分析:收集肺癌患者术后石蜡标本54例以及癌旁肺组织标本6例,连续切片,提取总RNA,q-PCR检测相关差异miRNA的表达。(7)采用GraphPad Prism 6统计软件进行统计学分析,计量资料以均数±标准误表示,两组间比较采用t检验,多组计量资料采用单因素方差分析,以p<0.05表示差异有统计学意义。[结果](1)A549细胞经CCL19因子处理后差异表达多种miRNA,表达量上调到2倍或以上且差异有统计学意义的miRNA有1 1个,表达量下调为0.5倍或以下且差异有统计学意义的miRNA有17个。(2)趋化因子CCL19能够下调A549细胞E-cadherin蛋白表达(p<0.05),上调N-cadherin蛋白(p<0.01)和Snai1蛋白(p<0.05)的表达;过表达miR-493-5p可以削弱CCL19因子对E-cadherin蛋白表达的下调作用(p<0.01)和对N-cadherin 蛋白(p<0.05)、Snai1 蛋白(p<0.01)表达的上调作用。(3)趋化因子CCL19可以明显提高A549细胞的迁移和侵袭能力(p<0.05);过表达miR-493-5p可以削弱CCL19因子对A549细胞迁移和侵袭能力的促进作用(p<0.05)。(4)趋化因子CCL19能够下调A549细胞c-Met和AKT蛋白表达(p<0.05),miR-493-5p过表达可以削弱CCL19对A549细胞c-Met蛋白和AKT蛋白表达的促进作用(p<0.05)。(5)与癌旁正常肺组织相比,非小细胞肺癌组织中miR-493-5p的表达明显下调(p<0.05);发生淋巴结转移或有脉管癌栓的患者癌组织中miR-493-5p含量明显低于未转移患者癌组织(p<0.05);男、女肺癌患者、宣威肺癌与非宣威肺癌患者、60岁及以上与60岁以下患者组织中miR-493-5p的表达差异无统计学意义(p>0.05)。[结论]CCL19因子能够通过下调miR-493-5p的表达,解除miR-493-5p对c-Met的抑制作用,进而可能活化AKT信号通路,促进肺癌细胞A549发生上皮间质转化,提高A549细胞的迁移和侵袭能力。