虾青素在香烟烟雾提取物诱导气道上皮MUC5AC高分泌中的作用

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背景:气道黏液高分泌是慢性气道疾病的重要病理特征。黏蛋白是维持气道黏液黏弹性的主要成分,MUC5AC是病理状态下气道主要的分泌蛋白。吸烟是慢性气道疾病主要危险因素。香烟中活性氧激活EGFR,顺次激活下游信号通路,诱导黏蛋白MUC5AC高表达。虾青素是类胡萝卜素的一种,具有极强的抗氧化活性,可以清除氧自由基,抑制ROS的产生。基于ROS在气道黏蛋白MUC5AC高分泌中的作用及虾青素的抗氧化活性,我们探讨虾青素对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白MUC5AC的作用。目的:探讨虾青素对香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白MUC5AC高分泌的作用及相关机制。方法:(1)体外培养A549细胞,利用香烟烟雾提取物构建气道黏蛋白MUC5AC高分泌模型。MTT法检测虾青素对于细胞增殖的影响,确定虾青素的浓度。给予不同浓度的香烟烟雾提取物.(2.5%、5%、10%)刺激A549细胞24小时,采用RT-PCR检测MUC5ACmRNA变化,ELISA检测MUC5AC蛋白变化。确定构建模型成功后,将细胞分为5组:阴性对照组、模型组、模型+8uM ATX组、模型+16uM ATX组、模型+32uM ATX组;分别采用RT-PCR法及ELISA法检测MUC5AC基因转录及蛋白表达情况。(2)将细胞分为5组:阴性对照组、模型组、模型+ATX (32uM)组、模型+DMTU (20uM)组、模型+ATX+DMTU组。多功能酶标仪检测细胞内ROS变化、RT-PCR检测MUC5AC基因转录变化,ELISA法检测MUC5AC蛋白表达变化,Western blot法检测EGFR、p-EGFR变化。结果:(1)成功构建香烟烟雾提取物诱导气道黏蛋白MUC5AC高分泌模型;不同浓度香烟烟雾提取物刺激A549细胞24小时后,MUC5ACmRNA及蛋白表达增加,且呈浓度依赖性。MTT结果显示,虾青素浓度低于32uM时对于细胞增殖作用较弱,当虾青素浓度达到64uM时,细胞增殖抑制率超过50%,所以选择8uM、16uM.32uM三个浓度为实验浓度。不同浓度虾青素干预后可以明显降低香烟烟雾提取物诱导的MUC5AC mRNA及蛋白表达。(2)与模型组相比,虾青素(32uM)干预组可以明显降低细胞内ROS含量,Western blot结果显示EGFR、p-EGFR含量也明显降低。结论:(1)香烟烟雾提取物可以刺激气道上皮细胞MUC5AC基因转录和蛋白表达,而虾青素可以降低香烟烟雾诱导的MUC5AC基因转录和蛋白表达(2)虾青素降低香烟烟雾提取物诱导的MCU5AC基因转录和蛋白表达可能是通过抑制ROS产生,抑制EGFR磷酸化发挥作用的。
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