第一部分短时血清培养与多聚赖氨酸对耳蜗螺旋神经节细胞活性与贴附性的作用目的:体外分离大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(Spiral Ganglion Neurons, SGN),探索急性分离后短时血清培养可提高耳蜗SGN的活性,同时观察多聚赖氨酸对耳蜗SGN的贴附性影响,为采取膜片钳技术研究耳蜗SGN电生理特性提供实验平台。方法:采用急性分离的方法获得耳蜗SGN后,进行短时间的血清培养,同时在培养皿的底部加入多聚赖氨酸。分别比较耳蜗SGN在活性和贴附性上与未进行血清培养及未加多聚赖氨酸时的差异。结果:1.急性分离后的耳蜗SGN,短时血清培养后比不培养的能获得更好的细胞状态,可以记录出稳定的电流曲线,并且能持续良好的细胞活性约5小时,而不加血清培养的细胞,良好活性只能持续约半小时。2.在培养皿底加用多聚赖氨酸,可明显提高耳蜗SGN的贴附性。结论:急性分离方法得到的耳蜗SGN,通过加血清短时培养及在培养皿底加多聚赖氨酸,可明显提高耳蜗SGN的活性及贴附性,增加了细胞的记录时间和封接成功率。从而有利对耳蜗SGN做进一步电生理学的研究。第二部分水杨酸钠对大鼠耳蜗螺旋神经节细胞外向延迟整流钾电流及其尾电流的影响目的:记录水杨酸钠作用下,急性分离新生大鼠耳蜗SGN延迟整流钾通道电流及其尾电流的电流曲线。分析水杨酸钠(Sodium Salicylate)对耳蜗SGN钾电流及其尾电流的影响,并初步探讨其耳毒性机制。方法:采用全细胞膜片钳技术记录耳蜗SGN外向延迟整流钾电流及其尾电流曲线。同时记录水杨酸钠作用下,此二电流的变化。结果:Protocol设置钳制电压为-60mV,刺激电压从-80 mV～﹢60mV逐渐去极化,阶跃电压为﹢10 mV,持续时间为500ms。可在耳蜗SGN上记录到外向整流钾电流,该电流对4-AP敏感,具有延迟整流特性;在细胞外液中加入1mmol/L水杨酸钠,能明显抑制耳蜗SGN延迟整流钾电流。﹢50mV的去极化电压刺激后引出的最大稳态电流幅值减少了46.3±2%;水杨酸钠对此电流的抑制作用与细胞外液中水杨酸钠的浓度呈剂量呈正相关,即水杨酸钠浓度越大,对电流的抑制作用越大;外液洗脱后耳蜗SGN外向延迟整流钾电流可基本恢复正常。另外,将Protocol设置为先加预刺激-65mV～﹢40mV,紧接给予去极化刺激,-40mV～﹢80mV,可记录出延迟整流钾电流后的尾电流曲线。加用水杨酸钠作用后,水杨酸钠可降低尾电流峰值,并加速尾电流的失活。结论:水杨酸钠可抑制耳蜗SGN外向整流钾通道电流及其尾电流峰值,并加速尾电流的失活。钾通道与耳蜗SGN动作电位的产生密切相关,抑制钾通道后动作电位产生受到抑制,尾电流失活加速可致耳蜗SGN电活动异常。耳蜗SGN电生理活动异常可致听觉信息传导功能受损,导致听觉功能障碍,从电生理角度阐述了水杨酸钠耳毒性部分机制。