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【目的】 随着神经干细胞移植治疗神经系统疾病研究的逐渐深入,在体监测干细胞分布、存活、分化、功能状态及治疗效果等特征性信息的检测方法越显重要。本课题以正电子成像技术(PET)作为在体可视化监测手段,客观准确地显示神经干细胞移植治疗帕金森病(PD)干细胞分化结果和移植治疗效果,建立活体干细胞治疗的无创性监测技术平台,探索干细胞体内诱导分化的规律、条件、质量控制和影响因素等,完善神经干细胞移植的临床评估方案,并为其他干细胞治疗应用探索提供研究基础。 【材料与方法】 从自然流产的人胚胎眼球中分离、培养出人胚胎视网膜色素上皮细胞(RPE),经流式细胞技术、G显带染色体分析、体外诱导分化、逆转录PCR分析及免疫荧光染色方法进行神经干细胞特异性鉴定。 建立帕金森病SD大鼠模型,随机分为治疗组和对照组。利用立体定位技术将RPE细胞移植于治疗组PD模型大鼠纹状体内;对照组大鼠纹状体内移植相同剂量的生理盐水。 根据移植前后大鼠旋转行为改善及脑纹状体酪氨酸羟化酶(TH)免疫组织化学染色改变评估干细胞分化结果和移植治疗效果。 确定多巴胺D2受体、多巴胺转运蛋白(DAT)为RPE细胞分化细胞(即多巴胺神经元)的标志物,11C-Raclopride、11C-β-CFT为相应的PET成像放射性示踪剂。进行移植前后的11C-Raclopfide、11C-β-CFT PET显像,观测D2受体及DAT变化情况,并运用视觉分析、感兴趣区(ROI)方法分析治疗组、对照组移植前后显像变化,并对结果做统计分析。 【结果】 经鉴定RPE细胞具有神经干细胞特征,并能在一定诱导条件下分化为多巴胺能(DA)神经元。 移植前1~4周、移植后1~8周大鼠旋转行为检测结果:治疗组由移植前296±82圈/30分钟下降至212±102(p=0.0008);而对照组移植前(299±72)、移植后(310±85),临床表现无改善(p=0.4259)。 TH免疫组化染色显示移植后治疗组大鼠纹状体内TH阳性细胞增多、着