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目的:对不同产地、不同年份艾挥发油,以及不同产地、不同年份艾在相同状态下燃烧产生的艾烟进行成分分析,获取艾灸生成物成分的关键性数据,为艾灸生成物安全性评价提供研究资料。比较艾灸生成物对肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)大鼠的干预效应,分析艾灸生成物中发挥生物学效应的关键因素;探讨艾灸及其生成物对IBS大鼠PK2/PK2R蛋白及mRNA的作用,阐释艾灸及其生成物干预IBS大鼠的效应机制。
方法：
(1)采用气相色谱-质谱法(gas chromatography-mass spectrography,GC-MS)分析湖北、河南、安徽、山东4个不同产地,以及1年陈、3年陈、5年陈3个不同年份艾挥发油与艾烟化学成分,比较其物质成分与成分类型之间的异同:
(2)采用球囊刺激乳鼠直结肠法制备IBS大鼠模型,随机分为模型组、温和灸组、无烟温和灸组、艾烟组,并与正常组进行对照。治疗结束后,观察各组大鼠一般情况,检测腹部撤回反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分;采用HE染色光镜下观察各组大鼠结肠组织病理学变化;应用免疫组织化学SABC法检测各组大鼠结肠与脊髓激动素原蛋白2(prokineticin2,PK2)及其受体PK2R蛋白表达,并进行图像分析;采用荧光定量PCR检测各组大鼠结肠与脊髓PK2及其受体PK2R mRNA表达。
结果：
(1)湖北、河南、安徽、山东4个不同产地,以及1年陈、3年陈、5年陈3个不同年份艾挥发油成分存在较大差异;湖北、河南、安徽、山东4个不同产地,以及1年陈、3年陈、5年陈3个不同年份艾燃烧生成的艾烟化学成分存在较大差异;
(2)不同产地、不同年份艾挥发油化学成分以萜类化合物、芳香族化合物成分为主:不同产地、不同年份艾烟化学成分主要为烷烃,烯烃,芳香烃,醇,酮,酸,酯;
(3)艾挥发油共性成分中含有对人体有益的化学成分,共性成分中未发现对人体有明显毒理作用的化学成分;艾烟共性成分中既含有对人体有益的化学成分,亦含有可能对人体产生不利影响的物质;
(4)造模及治疗期间,正常组大鼠饮食正常,体重增加,活动敏捷,大便成形,粪质软硬适中,皮毛光泽,肛门周围皮毛干净;造模后,与正常组大鼠比较,IBS模型大鼠摄食减少,体重增长缓慢,易激惹,粪质稀软,不成形,部分大鼠肛门周围皮毛污秽;治疗后,与模型组大鼠比较,各治疗组大鼠体重增加,粪质改善,皮毛较模型组干净,偶有大鼠肛门周围皮毛污秽,温和灸组大鼠粪质改善明显;
(5)正常组、模型组、温和灸组、无烟温和灸组、艾烟组各组大鼠结肠结构完好,粘膜上皮无缺损,腺体排列整齐,粘膜及粘膜下层无明显充血、水肿、炎性细胞浸润等异常改变;
(6)与正常组大鼠比较,模型组大鼠AWR评分明显升高(P＜0.01);与模型组比较,温和灸组大鼠20、40、80mmHg强度刺激下AWR评分降低(P＜0.01,P＜0.05),无烟温和灸组大鼠20、40mmHg强度刺激下AWR评分降低(P＜0.01,P＜0.05),艾烟组.AWR评分无显著变化(P＞0.05)。
(7)正常组大鼠结肠与脊髓PK2/PK2R蛋白及tuRNA低表达;与正常组比较,模型组大鼠结肠与脊髓PK2/PK2R蛋白及mRNA表达均明显增强(P＜0.01,P＜0.05);与模型组比较,温和灸组大鼠结肠与脊髓PK2/PK2R蛋白及mRNA表达降低(P＜0.01,P＜0.05),无烟温和灸组大鼠结肠与脊髓PK2蛋白及mRNA、脊髓PK2R蛋白表达降低(P＜0.01,P＜0.05),艾烟组大鼠结肠PK2蛋白表达降低(P＜0.05)。与温和灸组大鼠比较,无烟温和灸组大鼠脊髓PK2/PK2R蛋白表达较高,二者具有统计学差异(P＜0.01,P＜0.05)。
结论：
(1)不同产地、不同年份艾挥发油化学成分不尽相同,主要成分为萜类化合物、芳香族化合物;不同产地、不同年份艾烟化学成分亦不尽相同,主要成分为烷烃,烯烃,芳香烃,醇,酮,酸,酯;
(2)艾挥发油及艾烟既含有对人体有益的化学成分,亦含有可能对人体产生不利影响的化学成分:
(3)温和灸与无烟温和灸均能降低IBS大鼠的内脏高敏感状态,其中温和灸的作用优于无烟温和灸。
(4)温和灸能够下调IBS大鼠结肠与脊髓异常增高的PK2/PK2R蛋白及mRNA表达,该作用可能是其降低IBS内脏高敏感状态,治疗IBS的重要机制。
(5)无烟温和灸能够下调IBS大鼠结肠和脊髓PK2蛋白及mRNA、脊髓PK2R蛋白的表达,该作用可能是其降低IBS内脏高敏感状态,治疗IBS的重要机制。
(6)温和灸对IBS大鼠结肠与脊髓PK2R蛋白及mRNA、脊髓PK2蛋白的调节优于无烟温和灸,该作用可能是温和灸对IBS大鼠的干预效应优于无烟温和灸的重要机制。