粘虫核型多角体病毒离体培养的特性研究

来源 :河北农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:czw6229835
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本文系统研究了粘虫核型多角体病毒(MsNPV)在细胞系中离体培养的特性。不同细胞系对MsNPV的敏感性不同。NEAU-Ms-7311是支持MsNPV复制的较适细胞系。 MsNPV在Ms-7311细胞系中的生长曲线测定表明:在病毒接种后0~20小时为细胞吸收MsNPV-NOV阶段,20h时吸收达到最大值,胞外MsNPV-NOV的病毒滴度达到最小值为2.41×103TCID50/mL;20~48h这一阶段毒力滴度增幅最大,由2.41×103TCID50/mL迅速增至2.00×103TCID50/mL;48~168h病毒粒子增殖缓慢:144h胞外MsNPV-NOV病毒滴度达到最大值为2.57×106TCID50/mL;168h后胞外MsNPV-NOV病毒滴度急剧降低,其病毒滴度为7.89×104TCID50/mL。 MsNPV毒源以0.5TCID50/cell量接种到NEAU-Ms-7311细胞后,经未稀释连续传代15次。第一代至第五代病毒滴度提高,第五代时MsNPV病毒滴度达到最大值3.37×100TCID50/mL。但在第五代之后病毒滴度表现出下降趋势,最低降至5.57×103TCID50/mL。细胞感染率以第二代病毒最高可达57.89%,从总的趋势来看感染率是逐步下降的。在连续传代培养中多角体的产量和毒力变化明显,第一代平均每个细胞可产12.35个PIB,而在第六代则仅产5.99个PIB,用不同代多角体处理粘虫初孵幼虫,生物测定表明,七代之前离体复制的MsNPV毒力比较稳定,幼虫死亡率保持在67.27%~63.05%之间,从第七代开始迅速下降,到第十五代时只有21.82%。 利用空斑技术对离体增殖的第3、5、8、13、15代病毒分别进行纯化克隆,共获得26株克隆株。生物测定表明:来源于第三代病毒中只有C4、C9克隆株对初孵粘虫的校正死亡率为77.21%、70.20%,均高于第三代病毒和野生株(68.57%,66.72%),来源于第5、8、13、15代病毒克隆株毒力均低于野生株的毒力,获得两个毒力高的克隆株C4、C9。 测定了克隆株C4、C9的离体培养特性,结果表明,C4、C9的TCID50/mL分别为1.79×106、1.38×106;C4的细胞感染率与多角体产量分别为58.32%和14.92PIBs/cell,C9的感染率和多角体产量为54.43%和13.56PIBs/cell。 对C4、C9克隆株、F3、野生株病毒以粘虫初孵幼虫为试虫进行生物测定,结果表明它们的LC50分别为1.16×104PIBs/mL、1.04×104PIBs/mL、1.52×105PIBs/mL、1.17×104PIBs/mL。C4、C9克隆株的LC50低于野生株和F3病毒,由毒力回归方程知粘虫初孵幼虫对C4、C9克隆株的敏感性低于野生株MsNPV。但是可以说明MsNPV在Ms-7311细胞系中利用空斑技术能够获得高毒力克隆株。
其他文献
期刊
目的:探讨糖皮质激素眼液在用于流行性角膜结膜炎(EKC)治疗时的效果.方法:将我院门诊随访的106例EKC患者随机等分为对照组和观察组两组,分别应用常规抗病毒治疗和常规抗病毒+
目的:探讨胃癌根治术后胃瘫综合征的护理措施.方法:回顾分析14例胃癌术后发生胃瘫综合征患者的护理资料.结果所有患者均采用保守治疗,同时给予心理护理,有效地胃肠减压、维持
目的:探讨集束化护理对预防长期卧床住院患者褥疮发生的作用.方法:2015年12月—2017年12月期间,选择本院长期卧床住院时间114例作为研究资料,随机分组各57例,对照组实施常规
芜菁花叶病毒(TuMV)是植物病毒中最大的属——马铃薯Y病毒属的一个重要成员,在世界范围内广泛分布,能侵染43科、156属的300多种植物,其为害仅次于黄瓜花叶病毒(CMV)。本研究分离纯化
期刊
植物内生真菌是一类具有重要价值的资源微生物,在促进农业的可持续发展和医药领域中具有广阔的应用前景。试验采用组织块分离法分离山葵根、叶柄以及叶片中的内生真菌,经严格
目的:研究放射诊断在颈椎病患者康复中的应用价值.方法:选择2015年5月—2016年5月医院收治的颈椎病患者74例,随机分为观察组和对照组,每组患者37例.在常规治疗的基础上,对照
目的:对比研究腹部超声与阴道超声在诊断妇科急腹症中的价值.方法:随机将50例妇科急腹症患者均分为腹部超声组、阴道超声组,将各组超声结果与手术病理结果进行比较.结果:腹部
目的:探析磷酸铝凝胶在溃疡性结肠炎治疗中的应用疗效.方法:随机选取我院自2014年10月至2016年8月期间接受治疗溃疡性结肠炎的患者86例,根据随机分类法分为实验组和对照组各4