增效蛋白(Enhancin)是一类主要由昆虫杆状病毒基因编码金属蛋白酶,分子量大小约89-110KDa,它通过破坏昆虫中肠围食膜的完整结构,加速病毒粒子的侵入,从而提高生物杀虫剂对害虫的感染效率。为了寻找和确定增效蛋白在昆虫中肠围食膜上的靶标蛋白和进一步揭示Enhancin蛋白的增效机制,本研究设计如下：以粉纹夜蛾颗粒体病毒(TnGV)的增效蛋白Tn-En为研究对象,体外扩增获得目的基因,并进行原核表达。通过SDS-PAGE、Western blot和Ni+亲和层析验证目的蛋白。利用初步纯化的增效蛋白进行生物测定,并提取棉铃虫5龄幼虫的围食膜进行增体外酶解实验。构建重组杆状病毒真核表达载体Bacmid-pFastBac-En和含有报道基因EGFP的真核表达载体Bacmid-pFastBac-En-EGFP,转染昆虫细胞Sf9,实现目的基因的真核表达,通过SDS-PAGE和Western blot技术进行验证。Tn-En基因的原核表达成功,生物测定结果显示3VE可以提高死亡率23.34%,4VE提高死亡率22.22%,5VE提高死亡率1.67%。体外降解实验发现围食膜上某种大分子量的蛋白可以被增效蛋白降解。转染重组质粒Bacmid-pFastBac-En-EGFP的细胞在倒置荧光显微镜下观察有绿色荧光存在,电泳及杂交证明融合蛋白真核表达成功,为非分泌型蛋白。重组基因Bacmid-pFastBac-En经SDS-PAGE电泳检测结果显示在真核系统中表达成功。