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从编码遗传信息的DNA转录到最终蛋白质的合成,这一连串的基因表达过程,代表了有机体内最具影响力的生物化学过程。很自然地,有机体进化出各种调节机制,在诸多层次确保基因表达的准确性,一种称为“无义介导的mRNA降解（nonsense-mediated mRNA decay, NMD）"途径或‘’mRNA检查（mRNA survveillance）"机制就是其中的一个非常重要的过程。NMD（无义介导的mRNA降解）途径是一种通过降解突变的mRNA从而确保基因表达保真性的mRNA监督机制。顾名思义,NMD途径负责识别包含有早发性终止密码子（PTCs）的mRNA,并将其降解。用“NMD”或"mRNA监视”统称这种含有PTC的mRNA代谢途径,强调的是一种mRNA的质量控制机制,避免在细胞中从PTC-mRNA中翻译出C端截短的蛋白质,这很可能对细胞产生有害的作用。因此NMD途径在人类的一系列疾病中起到很重要的保护作用,这些疾病多由移码或无义突变而产生含有早发性终止密码子的mRNA,如：β-地中海贫血症、囊性纤维病变、肌肉营养失调和癌症。在NMD途经中,结合在外显子拼接复合体上的多种蛋白决定其对异常转录物的识别和降解的启动,其中UPF1和SMG1发挥主要功能。UPF1是一个RNA解旋酶和RNA依赖的ATP酶；而SMG1具有磷脂酰肌醇激酶活性,负责UPF1的磷酸化。RNA干扰是哺乳动物中功能缺失研究的一种有效基因手段,并且可以作为潜在的治疗各种人类疾病的方法。这是由于RNA干扰能够特定的降解靶标RNA。另外,通过病毒载体构建的稳定表达体系可以有效的应用于哺乳动物细胞,使靶标基因长期沉默。本研究构建了含有UPF1和SMG-1基因发夹结构的诱导开关基因表达干扰质粒。我们通过公认的运算法则设计了19bp siRNAs作为发夹结构的靶位点,并且用BLAST （Basic Local Alignment Search Tool）检查了目标位点的唯一性。然后分别合成Smg1, Upf2和control的寡核甘酸链。大部分shRNA的表达都依赖于RNA聚合酶Ⅲ（pol-Ⅲ）启动子,例如：H1或者U6启动子。我们构建的慢病毒载体包含了一个U6tetO-shRNA元件和一个CMV驱动的TetR-IRES-GFP盒子。我们将合成的寡核苷酸链处理成双链形式通过限制性酶切位点克隆到pFRT-U6tet0的载体。最后我们将U6tetO-shC, U6tetO-shS和U6tetO-shU插入到pTIG构建成完整的可诱导RNA干扰的慢病毒表达载体：pTIG-U6tetO-shC、, pTIG-U6tetO-shS和pTIG-U6tetO-shU.这个可调控的RNA干扰体系包括了TetO和TetR.在缺失四环素或者四环素衍生物（强力霉素）的情况下,TetR与TetO紧密结合导致转录过程被抑制。而加入四环素或四环素衍生物（强力霉素）时,它们会与TetR以1：1的比例结合,导致构象发生改变,释放TetO,从而使shRNA正常转录。我们利用慢病毒介导转化哺乳动物细胞HEK293T细胞得到重组病毒,经鉴定后感染细胞AD293,目的基因在细胞中得以高效表达。通过继代培养和单克隆化,得到强力霉素诱导干扰UPF1和SMG-1表达的稳定细胞株。为进一步研究两种蛋白在细胞周期和基因表达调控中的功能及NMD途径的机制奠定基础。