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目的:研究IL-22经CCL2-CCR2途径调控肝脏巨噬细胞减轻肝纤维化的作用和机制,进一步明确IL-22抑制肝纤维化的作用。方法:采用M-CSF（50ng/ml）诱导小鼠骨髓细胞,使其分化成为巨噬细胞。通过使用脂多糖（1ug/ml）刺激骨髓来源的巨噬细胞,使骨髓巨噬细胞极化成为M1型巨噬细胞。通过流式细胞技术检测巨噬细胞极化情况和巨噬细胞的诱导率。使用IL-22干预M1型巨噬细胞,IL-22浓度分组0ng/ml、20ng/ml、40ng/ml;使用CCR2拮抗剂干预M1型巨噬细胞,CCR2拮抗剂浓度分组0ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml、80ng/ml、160ng/ml、320ng/ml。CCK8法检测诱导刺激的细胞增殖情况。流式细胞技术检测巨噬细胞的诱导率和CCR2的含量。通过Transwell检测CCL2-CCR2对巨噬细胞的迁移能力的影响。通过免疫荧光技术检测IL-22及CCR2拮抗剂对巨噬细胞CCR2受体数量的影响。通过腹腔注射CCl4建立小鼠纤维化模型建立,C57BL/6小鼠随机分成五组:（1）空白对照组:不给予任何处理;（2）肝纤维化组:腹腔注射CCl4;（3）纤维化+IL-22治疗组:腹腔注射CCl4,30分钟后注射IL-22;（4）纤维化+CCR2拮抗剂治疗组:腹腔注射CCl4,30分钟后注射CCR2拮抗剂;（5）纤维化+IL-22+CCR2拮抗剂治疗组:腹腔注射CCl4,30分钟后注射IL-22,30分钟后注射CCR2拮抗剂。CCl4的浓度为20%,IL-22的注射浓度为100ng/ml;CCR2拮抗剂的注射浓度为1m M;IL-22和CCR2拮抗剂每只鼠每次注射剂量为0.06ml。通过免疫荧光技术检测IL-22及CCR2拮抗剂对肝脏巨噬细胞的迁移能力的影响。HE及Masson病理染色鉴定动物模型肝脏纤维化程度。结果:HE结果显示,肝纤维化组模型小鼠的肝脏可见比较明显的中央静脉缺如、肝小叶及汇管区结构不清晰,形成形状不同的假小叶结构,即纤维化模型成功建立;IL-22腹腔注射的纤维化小鼠肝脏HE染色结果可见较少区域形成假小叶结构;CCR2拮抗腹腔注射的纤维化小鼠肝脏HE染色结果也可见较少区域假小叶结构形成。提示IL-22及CCR2拮抗剂可减轻肝纤维化。Masson三色染色实验结果显示,肝纤维化组模型小鼠的肝脏可见大量蓝染胶原纤维沉积,自汇管区周围向外延伸,胶原纤维包裹形成假小叶,即纤维化模型成功建立;IL-22腹腔注射的纤维化小鼠肝脏Masson染色结果可见较少蓝染的胶原纤维沉积,假小叶结构面积较小;CCR2拮抗腹腔注射的纤维化小鼠肝脏Masson染色结果同样见较少蓝染的胶原纤维沉积,假小叶结构面积较小,提示IL-22及CCR2拮抗剂可降低肝纤维化的程度。小鼠肝脏组织的免疫荧光结果显示,纤维化小鼠肝脏汇管区可见聚集的i NOS抗体阳性区域;IL-22腹腔注射的纤维化小鼠肝脏免疫荧光结果可见i NOS阳性面积减少,且CCR2受体拮抗剂的蛋白标记数量也在降低;CCR2拮抗腹腔注射的纤维化小鼠肝脏免疫荧光结果可见i NOS阳性面积减少,且CCR2受体拮抗剂的蛋白标记数量也在降低,提示IL-22及CCR2拮抗剂可降低肝纤维化的程度。通过CCK8法得出LPS、IL-22和CCR2拮抗剂对细胞增殖的最适浓度分别为1000ng/ml,20ng/ml,20ng/ml。流式细胞术的结果显示,在培养的骨髓来源的巨噬细胞中加入LPS后,极化成M1型巨噬细胞的百分比为89.1%,加入CCR2拮抗剂后M1型巨噬细胞的百分比下降为76.8%,加入IL-22后M1型巨噬细胞的百分比下降为67.3%,IL-22及CCR2拮抗剂共同处理后M1型巨噬细胞的百分比下降为64.2%,得出IL-22与CCR2拮抗剂相同的抑制巨噬细胞极化的功能。此外,巨噬细胞的免疫荧光测定结果显示,LPS和IL-22共同干预组的M1型巨噬细胞表面特异性抗体i NOS数量呈下降趋势,CCR2受体含量也出现呈下降趋势;LPS和CCR2拮抗剂共同干预组的M1型巨噬细胞表面特异性抗体i NOS数量呈下降趋势,CCR2受体含量同样出现呈下降趋势;LPS和IL-22、CCR2拮抗剂共同干预组的M1型巨噬细胞表面特异性抗体i NOS数量呈下降趋势,CCR2受体含量也出现呈下降趋势。IL-22可降低了M1巨噬细胞外表面CCR2的表达和M1型巨噬细胞的极化能力。我们的数据还表明,高浓度的IL-22和CCR2拮抗剂均可抑制M1巨噬细胞的增殖。Transwell图像及数据分析显示,M1型巨噬细胞的迁移能力强于M0型巨噬细胞。当IL-22和（或）CCR2拮抗剂干预M1型巨噬细胞后,其迁移能力均有下降,两者联合后的作用的能力显示,IL-22和CCR2-CCL2的阻滞对M1型巨噬细胞的迁移抑制作用有相同之处。结合先前的巨噬细胞免疫荧光结果,IL-22对M1巨噬细胞的抑制作用可能与CCL2—CCR2配体受体相关。通过免疫荧光技术检测小鼠肝脏中i NOS和CCR2的表达量,发现注射CCl4的肝纤维化组与CCl4与IL-22共同注射组、CCl4与CCR2拮抗剂共同注射组、CCl4与IL-22和CCR2拮抗剂共同注射组的小鼠中相比,i NOS和CCR2的表达明显下调,与先前的M1型巨噬细胞免疫荧光结果一致。结论:IL-22通过抑制巨噬细胞的CCL2-CCR2配体受体的结合,抑制巨噬细胞向M1型极化进而减少巨噬细胞向肝脏的迁移和聚集,从而减轻肝脏炎症向肝纤维化的发展。