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甜菜是世界上重要的糖料作物,甜菜在生产中遇到立枯病、褐斑病、丛根病、根腐病等诸多病害,严重制约了其产量和品质。在防治甜菜诸多病害的方法中,抗病品种的选育是最有效的。核糖体失活蛋白(RIPs)是一类对真菌、细菌、病毒等具有广谱抗性的可以抑制病菌生长增殖能力的蛋白质。本实验采用PCR、RT—PCR方法对第一代转RIPs基因甜菜进行了分子检测,并对经过分子检测鉴定为阳性的植株进行抗病性鉴定及生理特性的研究,从而在第一代转RIPs基因甜菜中筛选出具有遗传稳定性、抗病性兼具其他性状优良的转基因株系,为甜菜抗病育种提供基础材料和理论依据。本实验取得的主要研究结果如下:
1、对第一代转RIPs基因甜菜进行PCR和RT—PCR检测,表明RIPs基因已成功转入甜菜并能稳定遗传;
2、对获得的转化植株进行抗褐斑病性鉴定,采用喷雾接种法接种甜菜褐斑病菌,浓度为7000-10000个孢子(菌丝、菌丝断裂体)/ml,接种第一代转RIPs基因甜菜植株6株,获得对甜菜褐斑病具有抗性的植株4株;
3、对获得的转化植株进行抗丛根病性鉴定,采用摩擦接种的方法接种甜菜坏死黄脉病毒(BNYW),接种第一代转RIPs基因甜菜植株4株,获得对BNYW病毒具有抗性的植株2株;
4、对经过分子检测呈阳性和经过抗病性鉴定的第一代转RIPs基因甜菜植株的光合作用、呼吸作用、氮代谢、防御酶系相关生理指标进行研究与分析,结果表明RIPs基因的转入并没有对甜菜植株的生长和生理代谢产生负面影响。
5、通过分子检测与抗病性鉴定,获得抗褐斑病甜菜植株4株与抗丛根病甜菜植株2株,为甜菜抗病育种提供了基础材料。