【摘 要】
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目的:初步探讨mir-126在人脑胶质瘤中的表达情况及其与恶性胶质瘤U87细胞增殖、侵袭之间的相关性,进一步明确mir-126在胶质瘤中的作用机制。方法:①对24例经病理证实的胶质瘤
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目的:初步探讨mir-126在人脑胶质瘤中的表达情况及其与恶性胶质瘤U87细胞增殖、侵袭之间的相关性,进一步明确mir-126在胶质瘤中的作用机制。方法:①对24例经病理证实的胶质瘤组织与6例正常脑组织(脑外伤患者)进行实时荧光定量PCR,检测mir-126基因在胶质瘤组织与正常组织中的表达情况。②采用软件设计表达miRNA前体的寡核苷酸序列,退火后与质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR连接,并进行测序。所得质粒经脂质体转染U87细胞,荧光显微镜下观察转染效果。运用RT-PCR和凝胶电泳检测转染后mir-126基因的表达情况。③运用MTT法分析上调mir-126后对胶质瘤U87细胞生长增殖的影响。④运用RT-PCR和Western blotting检测靶基因基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况,并应用Transwell小室比较转染前后U87细胞的侵袭情况。结果:①实时荧光定量PCR检测胶质瘤组织中的mir-126的基因表达水平比正常脑组织要低。②转染质粒后,在荧光显微镜下观察到绿色荧光,证明转染成功。RT-PCR和电泳结果提示转染后mir-126表达增高。③MTT法显示mir-126对胶质瘤U87细胞的增殖有明显抑制作用。④RT-PCR和Western blotting结果显示转染mir-126后U87细胞中MMP-2的基因和蛋白表达明显下调,同时Transwell小室结果显示转染mir-126后细胞侵袭力明显降低。结论:发现胶质瘤中mir-126表达水平比正常脑组织较低;成功构建miRNA重组质粒后,并检测其表达情况,初步证实上调mir-126可能抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭。
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