目的：　　 肺癌是世界上发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤之一，现已居世界各国发病率及死亡率的首位。肺癌的病因和发病机制迄今尚未明确。一般认为肺癌的发病与吸烟、环境污染、呼吸系统疾病和致癌因素等有关，其中吸烟是公认的引起肺癌的最重要的危险因素。尽管吸烟是肺癌发病的首要原因，但非吸烟者尤其是女性肺癌患者的发病率近年来明显增高，特别是在东亚地区。近年来研究发现，亚洲女性的肺癌发病与其他种族地区存在较大差异，而人类乳头瘤病毒(humanpapillomavirus，HPV)感染可能是亚洲女性肺癌发病的重要因素。　　 人类乳头瘤病毒HPV是一种环状双链DNA病毒，能引起人体皮肤，黏膜的鳞状上皮增殖，而高危型(HPV16/18)与肿瘤的发生发展密切相关，其中HPV-16在肺癌的发生中是最常见的感染类型。HPV病毒癌基因活性主要在于其E6和E7蛋白，E6和E7蛋白主要通过降解抑癌基因p53、激活端粒酶、Rb活性等使细胞癌变。近期研究发现，在宫颈癌中晚期蛋白L1的表达可反映宫颈上皮内瘤变的发展及预后，随着CIN级别的增加或病变的加重，L1蛋白的表达依次降低，而在宫颈癌组织中L1蛋白的表达呈阴性。而在癌症的发展中L1蛋白与E6和E7蛋白的调节机制尚不确定。　　 端粒酶是一种核糖核蛋白，具有逆转录酶活性，能以自身RNA为模板合成端粒DNA末端重复序列，从而弥补细胞分裂时造成的端粒的不足，避免由此引发的染色体的不稳定及端粒危机，避免细胞的衰老和死亡。端粒酶激活及其活性表达上调是肺癌发病机制中的关键步骤，而其活性的高低主要取决于端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达水平，hTERT是端粒酶活性的限速因子。研究发现，在肿瘤中E6蛋白可以通过调节转录因子SP1与c-myc从而使hTERT的转录表达增高。研究该酶的转录调控方式对研究HPV感染对肿瘤的发生发展的作用具有重要的意义。　　 本课题以肺癌为主攻对象，以胸腔积液为检测基础，采用qPCR方法检测肺癌患者胸腔积液中HPV16 L1 mRNA，E6 mRNA，E7 mRNA及hTERT mRNA的表达情况及其相关性的研究。　　 方法：　　 收集中国医科大学附属第一医院2011年至2012年门诊及住院患者胸腔积液204例，其中肺腺癌性胸腔积液140例，炎性胸腔积液43例，结核性胸腔积液21例。　　 RT-qPCR　　 1、提取mRNA　　 (1)标本的处理，离心:将胸水标本置于离心管，2000r/min，5min离心，弃上清，取沉渣。　　 (2) TRIZOL法提取mRNA:RNA可进行mRNA分离，或保存于-70℃冰箱。　　 2、逆转录:cDNA第一链合成　　 3、qPCR:聚合酶链式反应40个循环，生成熔解曲线　　 4、分析结果　　 (1)相对定量法计算L1，E6，E7及hTERT的mRNA表达水平的ΔΔCt值。　　 (2)生成ROC曲线，设定hTERT mRNA的阈值，分析良恶性标本中hTERTmRNA的扩增情况。　　 (3)分别分析腺癌性胸腔积液与良性疾病胸腔积液标本中HPV16 L1 mRNA，E6 mRNA，E7 mRNA的表达率。　　 (4)统计分析L1、E6、E7及hTERT的相关性。　　 结果：　　 1、在腺癌性胸腔积液中HPV16型L1mRNA、E6mRNA、E7mRNA与hTERT mRNA的表达水平均高于良性病变胸腔积液。　　 (1)腺癌性胸腔积液与炎性胸腔积液相比，HPV16型L1 mRNA、E6 mRNA、E7 mRNA与hTERT mRNA的表达水平显著增高(P＜0.05)。　　 (2)腺癌性胸腔积液与结核性胸腔积液相比，HPV16型E6 mRNA与hTERTmRNA的表达水平显著增高(P＜0.05)，而L1 mRNA与E7 mRNA的表达水平虽然增高但不显著(P＞0.05)。　　 2、HPV16感染的肺腺癌患者胸腔积液中L1与E6呈显著负相关　　 (1)在64例HPV16感染的肺腺癌患者胸腔积液中，L1mRNA低表达组的E6mRNA、E7 mRNA与hTERT mRNA的表达水平均高于L1mRNA高表达组。　　 (2) L1mRNA低表达组的E6mRNA表达水平显著高于L1mRNA高表达组(P=0.015)，且两者呈显著负相关(r=-0.33)。　　 3、腺癌性胸腔积液中hTERT mRNA表达与HPV16感染密切相关，尤其E6 mRNA高表达的肺癌患者其hTERT mRNA表达水平也明显增高　　 (1) HPV16感染组hTERT mRNA表达明显高于HPV16未感染组。(P＜0.0001)　　 (2) E6 mRNA高表达组中hTERT mRNA的表达水平显著高于E6 mRNA低表达组。(P=0.002)而E7 mRNA高表达组中hTERT mRNA的表达水平虽然高于E7mRNA低表达组，但无明显统计学差异(P=0.24)。　　 4、临床资料分析显示，感染HPV16的肺腺癌患者与性别，年龄密切相关　　 (1)肺腺癌患者中HPV16感染率女性(54.5％)高于男性(34.7％)，且有统计学差异(P＜0.05)。　　 (2)肺腺癌患者中HPV16感染的患者平均年龄（54.4岁）明显低于未感染HPV16的患者（63.9岁）且有统计学差异(P＜0.01)。　　 5、qPCR检测hTERT mRNA表达水平的ΔΔCt值，生成ROC曲线。ROC曲线下面积为0.904。根据ROC曲线，区分良恶性胸腔积液的最佳阈值为4.5×104，此时可达到最好的诊断效能:敏感性:92.9％，特异性:81.2％。　　 结论：　　 1、HPV16感染可能与肺癌的发生密切相关。　　 2、HPV16型L1 mRNA、E6 mRNA、E7 mRNA与hTERT mRNA在肺腺癌性胸腔积液的表达水平高于良性胸腔积液。　　 3、在感染HPV16的肺腺癌胸腔积液内，L1与E6的mRNA表达呈显著负相关，而肺腺癌胸腔积液内E6与hTERT的mRNA表达呈显著正相关。对HPV16持续感染引起肺癌发生机制的探讨可能具有一定的临床价值。　　 4、qPCR检测hTERTmRNA的表达具有较高的敏感性与特异性，对腺癌性胸腔积液的诊断具有重要的临床应用价值。