论文部分内容阅读
目的向结肠癌SW480细胞中导入化学合成的针对Survivin基因的siRNA片段,研究RNA干扰对SW480细胞增殖和凋亡的影响,为结肠癌的基因治疗提供实验依据,同时寻求新的、有效的RNA干扰片段。方法将体外合成的特异性针对人Survivin基因的siRNA序列1、序列2、序列3和对照序列,通过脂质体2000分组转染入SW480细胞中,转染后的24h、48h、72h,应用Western蛋白印迹法检测Survivin蛋白的变化,MTT法及流式细胞技术评价其对SW480细胞增殖和凋亡的影响。结果三条外源性siRNA分别作用于SW480细胞,转染后24h、48h、72h,三组Survivin蛋白的表达均出现下调(P<0.05),在48h时达到顶峰,抑制率分别为66.5%±2.1%、49.6%±2.8%和47.8%+3.1%,差异具有统计学意义(P<0.05);MTT法显示Survivin基因沉默后,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪结果显示,干扰后SW480的细胞周期发生明显变化,G2/M期细胞减少,凋亡细胞增多(P<0.05)。结论1.脂质体所介导的体外Survivin基因的siRNA片段,能有效地沉默结肠癌细胞的Survivin基因的表达,从而抑制结肠癌细胞的增殖和促进细胞的凋亡,为Survivin基因的siRNA临床治疗结肠癌提供了初步的实验依据。2.针对保守区域所设计的靶向siRNA,干扰效果更为显著。3.本研究结果为裸鼠肿瘤模型提供了良好的干扰序列。