黄曲霉毒素B1模拟表位的淘选及其免疫原性研究

来源 :郑州大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ming9981
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
黄曲霉毒素(Aflatoxin,简称AFT)主要是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉这几类真菌产生的真菌次级代谢产物,具有强毒性和强致癌性,所以被国际肿瘤研究机构定义为IA类有毒物质。目前经鉴定分离出来的毒素类别达到20余种,它们在结构上类似,其中以黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,简称AFB1)的毒性最强。为了消除AFB1含量的超标对食品安全影响,各个国家均对AFB1制定了相应产品的最高限量标准。  自噬菌体展示技术产生以来,模拟表位的概念应运而生,两项技术密不可分,模拟表位可谓是最具发展潜力的一个方向,运用噬菌体展示技术模拟抗原表位结构和化学特征得到的小分子肽,可运用于生命科学的许多领域,有关模拟表位的免疫原性的问题也日益受成为业界关注的焦点。  本研究采用噬菌体展示技术,利用7肽库淘选AFB1模拟表位并成功获得了AFB1模拟表位菌株。以抗AFB1单克隆抗体为靶分子,从噬菌体随机7肽库中进行4轮亲和淘选。从第4轮噬菌斑平板上随机挑选18个噬菌斑,经phage-ELISA和竞争ELISA鉴定,获得了14个能与靶标结合的阳性噬菌体,其中13个表位能被黄曲霉毒素B1抑制,分别为Phage1(P1)、P2、P4、P5、P8、P10、P11、P12、P13、P14、P15、P17和P18。分别进行DNA序列测定并翻译成相应的氨基酸序列。经过分析比对发现,获得的模拟表位中七个为相同序列。分别绘制6个不同序列的模拟表位的抑制曲线,结果显示 P10(YRRHEKD)抑制效果最好,得到的IC50值为20.41ng/mL,检测线性范围为1.5~50 ng/mL。  鉴定模拟表位的免疫原性并获得能诱导机体产生抗体的模拟表位。用1012 pfu/只的P10号噬菌体作为免疫原免疫Balb/c小鼠,二免后14天采集小鼠多抗血清,分别采用P10号噬菌体和AFB1-OVA为包被原。其中AFB1-OVA包被原时,小鼠多抗血清效价最高能够达到1:800,产生了能够与 AFB1人工抗原发生反应的抗体。  本研究成功获得了一个黄曲霉毒素B1的模拟表位,该表位具有一定的免疫原性,能够诱导机体产生针对黄曲霉毒素B1人工完全抗原的抗体。本研究对预防动物AFB1中毒具有重要意义,这一免疫预防策略对于防控其他真菌毒素也具有重要借鉴意义。
其他文献
从丹皮中分离水溶性多糖,所得粗多糖经反复冻融、高速离心、DEAE-52离子交换和分子筛分离等方法,得级分PSM-2bA与PSM-2bB,经高压液相色谱方法证明为均一组分,经GC-MS分析,PSM-2bA的单糖组成为Rha、Ara、Xyl、Man、Glc、Gal,摩尔比依次为3.55:7.06:2.11:1.00:5.60:12.91;PSM-2bB的单糖组成为Rha、Ara、Xyl、Man、Glc
肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7是一种重要的传染性病原菌。自1975年首次被分离以来,世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157:H7感染可致腹泻、出血性结肠炎(HC)
短花针茅荒漠草原是内蒙古草原的主要类型之一,是典型大陆性干旱气候的特有植被类型,在温带草原中占有重要的地位。本试验研究通过对内蒙古乌兰察布盟四子王旗短花针茅荒漠草
本文通过对荣华二采区10
期刊
舟蛾是河南省农林业重要害虫类群之一,也是种类较多、生物量较大、生态意义突出的昆虫类群之一。但一直没有开展舟蛾科昆虫的系统研究。通过3年5次深入太行山、熊耳山、伏牛山
食品中的农药残留超标是影响食品安全的重大问题,目前用于农药残留检测工作的主要方法之一是酶抑制法,主要用来检测蔬菜水果中的有机磷和氨基甲酰酯类农药残留。  乙酰胆碱酯
植物在整个系统进化的过程中,为了适应陆生环境,在其表面进化出一层很薄的膜状结构——角质膜。角质膜的厚度虽然只有0.7-13.5μm,它却具有非常重要的作用:阻止组织内水分非气孔
随着分子生物学的发展,利用基因工程技术进行小麦的遗传改良,已成为育种研究的一个方向。再生体系和转化体系的建立对基因工程育种具有重要意义。但小麦(Triticum aestivumL.)属