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黄曲霉毒素(Aflatoxin,简称AFT)主要是由黄曲霉、寄生曲霉和特曲霉这几类真菌产生的真菌次级代谢产物,具有强毒性和强致癌性,所以被国际肿瘤研究机构定义为IA类有毒物质。目前经鉴定分离出来的毒素类别达到20余种,它们在结构上类似,其中以黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,简称AFB1)的毒性最强。为了消除AFB1含量的超标对食品安全影响,各个国家均对AFB1制定了相应产品的最高限量标准。 自噬菌体展示技术产生以来,模拟表位的概念应运而生,两项技术密不可分,模拟表位可谓是最具发展潜力的一个方向,运用噬菌体展示技术模拟抗原表位结构和化学特征得到的小分子肽,可运用于生命科学的许多领域,有关模拟表位的免疫原性的问题也日益受成为业界关注的焦点。 本研究采用噬菌体展示技术,利用7肽库淘选AFB1模拟表位并成功获得了AFB1模拟表位菌株。以抗AFB1单克隆抗体为靶分子,从噬菌体随机7肽库中进行4轮亲和淘选。从第4轮噬菌斑平板上随机挑选18个噬菌斑,经phage-ELISA和竞争ELISA鉴定,获得了14个能与靶标结合的阳性噬菌体,其中13个表位能被黄曲霉毒素B1抑制,分别为Phage1(P1)、P2、P4、P5、P8、P10、P11、P12、P13、P14、P15、P17和P18。分别进行DNA序列测定并翻译成相应的氨基酸序列。经过分析比对发现,获得的模拟表位中七个为相同序列。分别绘制6个不同序列的模拟表位的抑制曲线,结果显示 P10(YRRHEKD)抑制效果最好,得到的IC50值为20.41ng/mL,检测线性范围为1.5~50 ng/mL。 鉴定模拟表位的免疫原性并获得能诱导机体产生抗体的模拟表位。用1012 pfu/只的P10号噬菌体作为免疫原免疫Balb/c小鼠,二免后14天采集小鼠多抗血清,分别采用P10号噬菌体和AFB1-OVA为包被原。其中AFB1-OVA包被原时,小鼠多抗血清效价最高能够达到1:800,产生了能够与 AFB1人工抗原发生反应的抗体。 本研究成功获得了一个黄曲霉毒素B1的模拟表位,该表位具有一定的免疫原性,能够诱导机体产生针对黄曲霉毒素B1人工完全抗原的抗体。本研究对预防动物AFB1中毒具有重要意义,这一免疫预防策略对于防控其他真菌毒素也具有重要借鉴意义。