【摘 要】
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以杆状病毒Autographa californica nuclear polyhedrosis virus(AcNPV)为载体,在昆虫细胞中成功地表达了人生长激素基因.先将人生长激素hGH基因的cDNA片段插入到转移载体质
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以杆状病毒Autographa californica nuclear polyhedrosis virus(AcNPV)为载体,在昆虫细胞中成功地表达了人生长激素基因.先将人生长激素hGH基因的cDNA片段插入到转移载体质粒pVL1393的多角体启动子下游多克隆位点的Smal切点中,重组DNA转化E.coli HB101后得到新的重组转移载体,命名为pVL1393hGH,经酶切电泳分析证明完整的hGH cDNA片段以正方向插入在pVL1393的多角体基因启动子下.将该质粒DNA与野生型AcNPV基因组DNA用磷酸钙沉淀法共转染秋粘虫(Spodoptera frugiperda)细胞Sf9,由于pVL1393多角体基因两侧同源序列的存在,与野生型病毒发生同源重组,从而使人生长激素基因替代野生型的多角体蛋白基因,得到重组病毒R-AcVhGH.该病毒由于不具有多角体蛋白基因,故毒粒不能组装成多角体包含体,在倒置显微镜下可以观察到多角体包含体的重组病毒空斑,经反复多次空斑分析,得到单一无多角体存在的高表达重组病毒,通过对重组病毒的酶切电泳及Southern杂交分析,证明了生长激素hGH的cDNA稳定地整合到了病毒基因组的正确位置中.用放射免疫法测定细胞上清hGH含量,其表达量达26.8ug/ml.该文还就细胞的贴壁培养及感染,细胞的悬浮培养及感染进行了研究.
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