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研究背景和目的：胃癌是一种常见的恶性肿瘤。组蛋白的修饰变化在癌症发生发展中起着重要的表观遗传调控作用。研究已证明,RBP2 (RB Binding Protein 2)是一种组蛋白去甲基化酶,能够对组蛋白H3上第四位赖氨酸位点的三或二甲基化进行去甲基化修饰,调控下游靶基因启动子活性,并参与胃癌的发生发展。自噬是受到严格调控的降解长寿命蛋白质和受损的细胞器的分解代谢途径,这个过程在癌症发生发展中也可能起重要作用。自噬相关蛋白BECN1 (Beclin 1)是自噬的形成和成熟过程中必不可少的分子,在BECN1启动子区存在RBP2特异性结合的位点。因此研究组蛋白去甲基化酶RBP2在胃癌自噬过程中的作用以及对BECN1的调控机制很有必要。实验方法：1.人体组织水平在21对人胃癌及对应的癌旁组织临床标本中通过免疫组织化学染色方法检测RBP2与BECN1在胃癌和癌旁组织中的表达水平及相关性。2.细胞水平在胃黏膜上皮来源的胃癌细胞系(AGS, BGC-823, GES-1)中,分别转染RBP2高表达质粒或者RBP2特异性干扰RNA,通过QRT-PCR和Western blotting法检测RNA水平和蛋白水平上高表达或抑制RBP2对细胞系中BECN1表达的影响。通过分子克隆构建PGL-3-BECN1启动子区质粒(BECN1启动子区含有RBP2特异性识别结合的CCGCCC序列),然后转染到胃癌细胞系中,用双荧光素酶检测RBP2是否对BECN1的启动子活性有直接或间接的调控作用。在转染RBP2高表达质粒或小干扰RNA的胃癌细胞BGC-823中,通过免疫荧光检测自噬作用强度的变化。3.动物模型用慢病毒包装RBP2小干扰RNA,转染到胃癌细胞BGC-823中进行浓度梯度筛选,在倒置荧光显微镜下观察荧光强度,确定最合适的转染浓度。之后将荧光较强的细胞用胰酶消化下来到细胞瓶当中扩大培养,用嘌呤霉素筛选,获得具有RBP2稳定干扰效率的稳转细胞株。将稳定表达RBP2 siRNA的胃癌细胞通过皮下注射到裸鼠体内,并以稳定表达Control shRNA的细胞株作为阴性对照。在肿瘤长出后开始测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线。之后通过QRT-PCR和免疫组织化学染色方法检测RBP2和BECN1的表达水平。实验结果：1.RBP2和BECN1在人胃癌组织标本中的表达水平高于癌旁组织中的表达水平,存在显著性差异,并与RBP2的表达呈正相关。同时,RBP2和BECN1的表达与患者的年龄,性别,肿瘤大小,分化程度无关。2.在胃癌细胞系(AGS,BGC-823,GES-1)中,抑制RBP2的表达会使BECN1的RNA和蛋白表达水平下降。相应地,上调RBP2的表达会使BECN1的表达水平增加。3.在胃癌细胞系中,RBP2可以通过结合到BECN1的启动子区(CCGCCC位点)直接调控BECN1的基因表达。4.在胃癌细胞系中,抑制或增强RBP2的表达水平会相应的影响胃癌细胞中的自噬作用强度。5.在裸鼠皮下成瘤模型中,稳定表达RBP2 shRNA的胃癌细胞实验组成瘤能力受到显著抑制,同时BECN1的表达水平下降,自噬作用降低。结论：RBP2通过影响BECN1的启动子区活性直接调控BECN1的表达,从而参与胃癌细胞的自噬过程。这可能是胃癌发生中一种新的与组蛋白修饰改变相关的分子调控机制,同时也可能提供一种潜在的胃癌治疗方法。