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目的本研究采用real-time RT-PCR、Western blot等技术手段探讨褪黑素干预后人胃癌细胞线粒体凋亡途径的变化,为进一步了解褪黑素的抑癌作用机制和寻找胃癌的有效治疗方法提供一定的理论依据。方法1.体外培养人胃癌细胞SGC7901、AGS、MGC803,3m M褪黑素干预细胞24h,并设立空白对照组。2.应用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色法检测褪黑素干预后,人胃癌细胞SGC7901、AGS、MGC803各组凋亡率的变化。3.应用real-time RT-PCR技术分析褪黑素干预后,三株胃癌细胞各组中MDM2、p53、Bax、Bcl-xl、Caspase-9 m RNA表达量的变化。4.应用Western blot技术检测褪黑素干预后,对培养的三株胃癌细胞各组p MDM2、MDM2、p53、Bax、Bcl-xl、Caspase-9蛋白水平的变化。5.应用Caspase-Glo 3/7活性试剂盒定量分析比较褪黑素干预后,三种细胞Casapse-3活性的变化。结果1.流式细胞术结果显示:与对照组相比,褪黑素干预后,三株胃癌细胞早期凋亡率增加,差异具有统计学意义。2.Real-time RT-PCR结果显示:SGC7901细胞中,经褪黑素干预后,MDM2、p53、Bax、Bcl-xl、Caspase-9 m RNA水平均升高。与对照组相比,各指标均表现出显著性差异。AGS细胞中,经褪黑素干预后,MDM2、Bax、Bcl-xl m RAN水平降低,p53、Caspase-9 m RNA水平升高。与对照组相比,各指标均表现出显著性差异。MGC803细胞中,经褪黑素干预后,Bax、Bcl-xl、Caspase-9 m RNA水平表达量降低,MDM2、p53 m RNA水平表达量升高。与对照组相比,各指标均表现出显著性差异。3.Western blot技术显示:SGC7901细胞中,与对照组相比,褪黑素干预后p MDM2、MDM2、Bcl-xl、Procaspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表达量均降低,p53、Bax蛋白表达量上升。差异均具有统计学意义。AGS细胞中,与对照组相比,褪黑素干预后p MDM2、MDM2、p53、Bcl-xl蛋白表达量减少,Bax、Procaspase-9和Cleaved Caspase-9蛋白表达增加。差异均具有统计学意义。MGC803细胞中,与对照组相比,褪黑素干预后p MDM2、MDM2、p53、Bax、Procaspase-9蛋白表达量降低,Cleaved Caspase-9蛋白表达升高。差异具有统计学意义。Bcl-xl蛋白表达量则无明显变化。4.Caspase-3活性检测结果显示:褪黑素干预后,与对照组相比,三株胃癌细胞Caspase-3的活性均明显升高,差异显著,具有统计学意义。结论褪黑素能明显促进人胃癌细胞SGC7901、AGS、MGC803的凋亡,抑制胃癌细胞的生长。其作用机制与p53介导的Bax/Bcl-xl线粒体途径(SGC7901、AGS)和部分转录非依赖(MGC803)的线粒体途径有关。