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目的:原花青素B2 (procyanidin B2,PC-B2)是一种广泛存在于植物中的多酚类化合物,具有清除自由基、抗癌等多种生物学功能。黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)是高温高湿地区常见的一种霉菌毒素,可导致肝细胞急、慢性损伤,流行病学研究表明,AFB1与人类肝癌的发生明显相关,其机制可能与AFB1代谢产物及代谢过程产生的自由基造成的氧化损伤有关。PC-B2在拮抗AFB1致肝细胞DNA氧化损伤方面的作用如何,相关文献较少。本研究旨在探讨PC-B2对AFB1致人肝细胞DNA氧化损伤的干预作用,探索其可能作用机制,为原花青素在防治AFB1相关肝病的合理应用提供理论和实验依据。方法:采用完全随机设计的体外细胞培养实验,以生长状态良好且处于对数期的人胚肝细胞(L-02细胞)为靶细胞,用不同浓度AFB1和PC-B2分别作用于L-02细胞并测定其细胞增殖活力的变化情况,并选择适宜的染毒和处理剂量;以选定剂量AFB1染毒,制备肝细胞损伤模型,用不同浓度PC-B2干预并进行分析。本实验分五个组:(1)空白对照组:只有L-02细胞和完全培养液;(2)溶剂对照组:加入含溶剂DMSO的培养液培养;(3)AFB1染毒组:加入含AFB1的培养液培养;(4)PC-B2处理组:分别加入含不同浓度PC-B2的培养液培养;以上各组细胞均孵育24h。(5)PC-B2干预组:先加入含PC-B2的培养液孵育12h,然后用新的含不同浓度PC-B2和一定剂量AFB1的培养液继续培养24h。实验后收集细胞进行分析,以MTT法测定细胞增殖活力的变化;通过酶联免疫吸附实验测定细胞中8-OHdG的含量,判断PC-B2对肝细胞DNA氧化损伤的影响,再应用荧光定量PCR法检测DNA修复基因hOGG1及其它相关基因的表达水平,实验从细胞和分子水平二个方面分析PC-B2拮抗AFB1致肝细胞损伤的作用与机制。结果:1.AFB1在10~40μg/ml的浓度范围内对L-02肝细胞生长呈剂量依赖性抑制作用,30μg/ml作用24h细胞增殖活力为69.9%,选为实验染毒浓度;PC-B2在100μg/ml时抑制细胞生长,25、50、75μg/ml促进细胞生长,且25μg/ml干预24h作用最明显,据此实验设计3、10、30μg/ml为PC-B2干预剂量。2.PC-B2干预组较30μg/ml AFB1染毒组细胞活力明显升高。高剂量干预组(30μg/ml PC-B2)与染毒组相比差异有统计学意义(P<0.05)3.AFB1染毒组8-OHdG(ng/ml)含量为2.779±0.089,明显高于溶剂对照组0.580+0.045(P<0.05);PC-B2干预组8-OHdG含量分别为2.550±0.078、2.376±0.109、1.873±0.065,均高于AFB1染毒组(P<0.05)。4.AFB1染毒组hOGG1基因表达明显低于对照组(P<0.05),PC-B2干预组细胞hOGG1基因表达明显高于AFB1染毒组(P<0.05),分别为AFB1染毒组的1.6、1.85、3.26倍。5.AFB1染毒组细胞Bcl-2/bax比值较对照组降低,PC-B2干预组则高于AFB1染毒组。结论:PC-B2在一定浓度范围内对L-02肝细胞的生长有促进作用,浓度太低无明显作用,太高则发挥抑制作用。适宜浓度的PC-B2干预能抑制AFB1所致肝细胞损伤。其机制可能通过调控修复基因hOGG1表达、参与肝细胞损伤过程中细胞凋亡的调控等而发挥作用。