【摘 要】
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Synaptotagmin是一种膜运输蛋白,参与调控动物细胞的膜融合,并受Ca2+的调节,起着钙传感器(Ca2+ sensor)的作用。Synaptotagmin是一个庞大的蛋白家族,由N端跨膜区、一个可变的
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Synaptotagmin是一种膜运输蛋白,参与调控动物细胞的膜融合,并受Ca2+的调节,起着钙传感器(Ca2+ sensor)的作用。Synaptotagmin是一个庞大的蛋白家族,由N端跨膜区、一个可变的连接区和C-端的两个串联排列的C2结构域组成。植物Synaptotagmin的蛋白序列同动物的类似,但其功能尚不清楚。拟南芥含有5种Synaptotagmin,近来的报道认为拟南芥SYT1在膜损伤修复及调节胞吞和病毒运动蛋白细胞间运输等方面担负着重要功能。本文对拟南芥Synaptotagmin2(SYT2)的表达、定位及功能进行了初步研究。
为了探测SYT2在拟南芥中的定位和功能,本实验利用Real time PCR和转PSYT2::GUS的转基因拟南芥研究SYT2组织定位和表达模式;利用转PCaMV35S::SYT2-GFP的转基因植物研究SYT2在细胞中的定位;并使用原核表达的GST-SYT2不同C2结构域融合蛋白在体外进行磷脂结合实验研究SYT2的C2结构域功能;利用拟南芥的T-DNA插入突变体和RNAi转基因植物研究SYT2在拟南芥中的表型及其生物学功能。
初步的研究结果表明,SYT2主要在成熟花粉中表达;SYT2在花粉管中以颗粒状存在,主要定位于高尔基体上。体外表达的SYT2的C2A(244-400)、C2B(401-537)及C2AB(247-537)片断均具有与膜脂(25％PS:75%PC)结合的功能,其中C2A和C2AB与膜脂的结合受Ca2+浓度的调节,而C2B在Ca2+不存在时就与膜脂有较高的结合。纯合的SYT2T-DNA插入突变体SALK_016690、SALK_072947、SLK_133731以及转基因RNAi的花粉萌发和花粉管伸长部分受抑。
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