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目的:本实验采用醋酸铅溶液诱导建立PC-12细胞铅中毒的模型,观察不同浓度醋酸铅对具有神经元特性的PC-12细胞的影响,和铅中毒神经系统损伤进展中凋亡相关蛋白的变化,以及驱铅扶正方对其干预效应,以探讨驱铅扶正方防治铅中毒神经系统损伤的作用机制。 方法:将PC-12细胞设置空白组、醋酸铅染毒组、含药血清组、阴性对照组和阳性对照组。不同浓度醋酸铅溶液刺激PC-12细胞,通过MTT法检测醋酸铅染毒组细胞生存率。含药血清浓度为10%、采血时间为2h的驱铅扶正方含药血清干预醋酸铅诱导的PC-12细胞,通过MTT法检测含药血清组和阳性对照组细胞生存率,免疫细胞化学法检测其细胞凋亡相关蛋白表达,免疫印迹技术检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bax和抑制凋亡蛋白Bcl-2、survivin的表达情况。 结果:1.醋酸铅溶液对PC-12细胞生存率的影响;醋酸铅浓度越高PC-12细胞生存率越低,细胞在100μl浓度为100μmol/L醋酸铅刺激24 h后,醋酸铅染毒组细胞PC-12细胞生存率接近50%(46.7%)。2.驱铅扶正方含药血清对PC-12细胞的作用;驱铅扶正方含药血清在浓度为10%时,并且于末次给药后2h采血,使染铅PC-12细胞增殖最为明显。3.与凋亡相关的蛋白在染铅细胞中的表达;醋酸铅染毒组凋亡蛋白caspase-3在细胞外基质明显表达。含药血清组抑制凋亡蛋白Bcl-2表达明显。阳性对照组细胞凋亡蛋白在细胞外基质均有不同程度的表达,但抑制凋亡Bcl-2表达不明显。4.细胞凋亡相关蛋白表达与神经系统损伤的关系;醋酸铅染毒组Bcl-2、survivin蛋白表达明显(△p<0.01);阳性对照组与醋酸铅染毒组比较caspase-3、Bcl-2、Bax、survivin蛋白表达均有显著的升高(*p<0.01);含药血清组与醋酸铅染毒组比较,caspase-3和Bax蛋白表达显著下降,Bcl-2和survivin蛋白表达显著升高(p<0.01),含药血清组较阳性对照组caspase-3和Bax蛋白表达显著下降,Bcl-2蛋白表达显著升高(#p<0.01)。 结论:1.建立PC-12细胞铅中毒模型,可选用100μl浓度为100μmol/L醋酸铅刺激24h的标准,达到细胞半数抑制率。2.驱铅扶正方含药血清在浓度为10%时,并且于末次给药后2h采血,使染铅PC-12细胞增殖最为明显。3.驱铅扶正方能有效治疗铅中毒神经系统损伤,其分子机制与凋亡信号通路有关。