中药治疗宫颈病变文献研究及苦参碱对宫颈癌细胞凋亡蛋白的影响

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[目的]宫颈癌是妇科最常见的恶性肿瘤之一,宫颈病变早期诊断与及时治疗对于预防宫颈癌有重大意义。近年来,中药治疗宫颈HPV感染、宫颈炎及CIN的报道越来越多,并逐渐凸显出优势。本文通过收集近10年中药局部治疗上述宫颈病变的临床观察型文献,整理所用方药并总结其用药规律,以期更好的指导临床,提高中药治疗上述宫颈病变的疗效。在此基础上,以某味最常用类别中药为例,实验中进一步研究其对宫颈癌SiHa细胞Bax. Bcl-2蛋白表达的影响,探讨其作用机制。[方法]1.文献研究:采用回顾性研究方法,收集2004年1月至2014年5月中国期刊全文数据库(CNKI)收录的中药局部治疗宫颈HPV感染、官颈炎及CIN的临床观察型文献,整理所用方药,建立excel数据库,通过统计分析得到药物类别、性味及归经等的分布特点,得到中药局部治疗的用药规律,从中医角度分析宫颈病变的病因病机及治疗特点。2.实验研究:在文献研究的基础上,以苦参碱作用于宫颈癌SiHa细胞,倒置显微镜下观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐(MTT)(噻唑蓝)比色法检测苦参碱对宫颈癌SiHa细胞增殖的影响,并筛选出苦参碱最佳作用浓度及作用时间。蛋白质印迹法(Western Blot)检测苦参碱干预后,宫颈癌SiHa细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的变化。[结果]1.文献研究:(1)根据资料来源及检索方法,共获得138篇文献,其中符合纳入标准的文献110篇,从中收集方剂共112首。(2)对所收集方药进行频次分析,总结出宫颈病变局部用药共144味,总用药频次为690,使用频次居于前三位的依次为冰片、黄柏、苦参。在前三味药中,苦参单味药局部治疗宫颈病变的情况最多。(3)按药物功能归类为14类,清热药、活血化瘀药位居前两位,其中清热药中清热燥湿类中药最常用。(4)按中药性味、归经分类,出现最多的依次为:苦寒药、心经药。2.实验研究:(1)苦参碱作用于宫颈癌SiHa细胞后,倒置显微镜下可见细胞皱缩、变圆,细胞质浓缩、水泡化等凋亡形态学改变。(2)细胞培养24、48、72小时后,空白对照组生长活跃,而苦参碱作用各组细胞增殖受到不同程度的抑制。随着作用浓度及时间的增加,抑制作用越明显,苦参碱作用72h后,细胞几乎全部死亡。根据测得24h、48h各孔吸光度值(OD值)计算各组抑制率,各组同空白对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。对各组抑制率结果进行分析,选取苦参碱作用时间为24h,作用浓度分别为2.0mg/ml、2.5mg/ml进行Western blot实验。(3)对照组、苦参碱作用浓度2.0mg/ml组及2.5mg/ml组三者比较,Bcl-2蛋白表达依次减少,Bax蛋白表达依次增加,各组差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.文献研究:从中医角度分析,宫颈HPV感染、宫颈炎及CIN等宫颈病变多因湿热之邪蕴结日久化变为毒,败坏形质,损伤血脉而致,湿热毒瘀乃发病之关键。故治疗上多以清热燥湿解毒为主,兼以活血化瘀,临床局部用药直达病所收效良好。2.实验研究:苦参碱对宫颈癌SiHa细胞增殖具有抑制作用,可诱导其细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达、促进Bax蛋白表达从而降低Bcl-2/Bax比率可能是其机制之一。
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