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目的:β-淀粉样肽(amyloid-β-pepfide:Aβ)的神经毒性被认为是阿尔茨海默病(AD)形成的主要因素。本室前期研究表明,可溶性寡聚化的AD可以激活MLK3-MKK7-JNK3信号通路,并在Aβ25-35作用的12 h有一活化高峰,JNK的激活在AD诱导的神经元凋亡中起着关键性作用。本实验采用体外培养的皮质神经元,研究自由基清除剂MCI-186(依达拉奉)拮抗Aβ神经毒性的作用及机制,以阐明Aβ神经毒性的信号转导机制,并为AD治疗药物的筛选提供理论依据。
方法:采用SD大鼠原代培养的皮质神经元,经Aβ25-35作用后作为AD的细胞模型。给予MCI-186后,应用DAPI染色进行凋亡的检测;应用免疫印迹、免疫沉淀检测MLK3、MKK7和JNK3的磷酸化(活化)和表达情况;应用免疫细胞化学观察p-JNKs向细胞核的转位和c-Jun的磷酸化。
结果:
1、DAPI染色结果显示,MCI-186对Aβ25-35诱导的神经元损伤具有保护作用,以20 mol/L作用最强。
2、免疫印迹、免疫沉淀结果显示,MCI-186可以抑制Aβ25-35引起的MLK3、MKK7、JNK3的活化。
3、免疫细胞化学结果显示,MCI-186减少Aβ25-35引起的JNKs核转位和p-c-Jun水平的升高。
结论:
1、MCI-186对Aβ25-35诱导的神经元损伤具有保护作用,以20μmol/L作用最强。
2、MCI-186通过抑制Aβ25-35作用下自由基生成,抑制MLK3的磷酸化,进一步使其下游信号蛋白MKK7、JNK3等磷酸化水平降低,下调了JNK信号通路,继而负调控核通路而起到神经保护作用。MLK3-MKK7-NK3信号级联反应将成为AD治疗药物的主要靶点。