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肝脏是动物体磷脂代谢的重要器官之一,肝中除了其他组织具有的CDP胆碱通路以外,还具有一条独特的由磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶2(PEMT2)催化磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)甲基化生成磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)的通路。已知肝脏的磷脂代谢中,总有部分转化为缩醛形式,含量很低的肝源性缩醛磷脂,通常只占0-5%,但它却能直接被转移到脂蛋白上。那么,这一部分磷脂是否对肝脏具有特殊的生理作用? 缩醛磷脂(plasmalogen)是甘油骨架sn-1位置上含有一个烯醚键(vinyl ether bond)的磷脂,主要存在于哺乳动物组织中。根据其甘油骨架头部基团的不同,主要分为两类:缩醛磷脂酰胆碱(plasmanylcholine,plas-PC)和缩醛磷脂酰乙醇胺(plasmenylethan-olamine,plas-PE)。缩醛磷脂的种类和含量因组织细胞的特异性不同而有所不同。因其在细胞中分布及结构上的特点,缩醛磷脂具有许多重要的功能,如介导细胞的融合,参与离子跨膜转运及胆固醇的运输,作为细胞第二信使的储存库等。其中,缩醛磷脂的抗氧化和抗癌作用受到了人们日益广泛的关注。 本研究从猪肝中提取和分离了缩醛磷脂,比较了缩醛磷脂对不同细胞系增殖的影响,观察了缩醛磷脂对大鼠肝癌细胞周期时相的影响,并初步探讨了缩醛磷脂对细胞周期信号通路、细胞增殖信号通路及细胞膜重要的信号蛋白——小窝蛋白(Caveolin)表达的影响。此外,还从细胞周期调控角度对PEMT2过表达抑制肝癌细胞增殖的机制进行了进一步的研究。旨在了解肝脏磷脂类信号分子对肝脏生物学功能及肝细胞增殖的影响机制,为开发和研制天然的磷脂类抗癌药物提供理论依据和技术支持。 (1) 采用有机溶剂提取总磷脂,高效薄层层析分离PC和PE,进一步用不同的展开体系分离纯化缩醛磷脂。建立了简易的分离和鉴定缩醛磷脂的方法。 (2) 体外培养大鼠肝癌细胞株(CBRH-7919)、人肝癌细胞株(HepG2和SMMC7721)、