HIF-2α启动子上游lncRNA-HIF2PUT在结肠癌中的表达及与肿瘤干细胞相关的功能研究

来源 :中国人民解放军医学院 解放军医学院 解放军总医院 军医进修学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:flypoet
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【目的】  初步研究HIF-2α启动子上游lncRNA-HIF2PUT在结直肠癌及癌旁组织中的表达情况。在此基础上明确lncRNA-HIF2PUT和HIF-2α表达的相关性及调控关系。初步探讨lncRNA-HIF2PUT在结直肠癌肿瘤干细胞中的生物学功能,及其中可能的分子机制。  【方法】  1.在结直肠癌及癌旁组织中,采用real-time PCR法检测lncRNA-HIF2PUT和HIF-2α的表达水平。2.设计合成 lncRNA-HIF2PUT干扰siRNA序列,将其转染至结直肠癌细胞系DLD-1中,采用real-time PCR技术检测lncRNA-HIF2PUT和HIF-2α表达情况。并在 lncRNA-HIF2PUT干扰siRNA序列转染后48h采用一系列体外生长实验检测lncRNA-HIF2PUT下调对结直肠癌肿瘤干细胞生物学特性的影响。包括:用real-time PCR法及western-blot法检测干细胞相关标志基因OCT4,SOX2,NANOG, KLF4和CD44,CD133的表达水平;MTS法和平板克隆形成实验检测DLD-1细胞的生长增殖情况;悬浮培养法干细胞成球实验检测下调lncRNA-HIF2PUT后DLD-1细胞干细胞成球能力,划痕实验检测DLD-1细胞的迁移能力变化。3.检测lncRNA-HIF2PUT表达下调HIF-2α的表达情况。  【结果】  1.lncRNA-HIF2PUT与HIF-2α在结直肠癌组织中的表达与癌旁组织中的表达无明显差异。2.lncRNA-HIF2PUT与HIF-2α在结直肠癌组织中的表达呈正相关。3.将lncRNA-HIF2PUT的siRNA序列成功转染到DLD-1细胞。下调lncRNA-HIF2PUT表达后干细胞相关基因OCT4和SOX2表达明显下降,肿瘤干细胞标志物CD44表达明显下降。MTS法检测结果显示DLD-1细胞的增殖能力明显降低;悬浮成球试验结果显示 DLD-1细胞形成的干细胞球状克隆数量明显减少;划痕实验证明DLD-1细胞迁移能力明显抑制。4.Real-time PCR及Western-blot结果均表明,下调lncRNA-HIF2PUT表达后DLD-1细胞HIF-2α表达也明显降低。  【结论】  本研究初步证实了HIF-2α启动子上游lncRNA-HIF2PUT可能是一个新的结直肠癌促进基因。在结直肠癌细胞中抑制lncRNA-HIF2PUT可以抑制HIF-2α的表达,从而抑制结直肠癌细胞增殖,迁移及干细胞自我更新能力。
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