【摘 要】
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蜜蜂作为主要的经济昆虫,不但可以为人类提供丰富的蜂产品,其最大的贡献还在于为农业授粉,在全球生态系统中发挥重要作用。意大利蜜蜂自上世纪70年代引入我国,已成为我国主要的养蜂品种。然而在养蜂生产中,意蜂普遍受到蜂螨的严重侵害。目前,蜂农主要以化学用药的方法防治蜂螨,与其他杀螨剂相比,氟胺氰菊酯(fluvalinate)具有广谱、高效等优势,在养蜂业中广泛使用。但在意蜂养殖生产中,应用氟胺氰菊酯类药物
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蜜蜂作为主要的经济昆虫,不但可以为人类提供丰富的蜂产品,其最大的贡献还在于为农业授粉,在全球生态系统中发挥重要作用。意大利蜜蜂自上世纪70年代引入我国,已成为我国主要的养蜂品种。然而在养蜂生产中,意蜂普遍受到蜂螨的严重侵害。目前,蜂农主要以化学用药的方法防治蜂螨,与其他杀螨剂相比,氟胺氰菊酯(fluvalinate)具有广谱、高效等优势,在养蜂业中广泛使用。但在意蜂养殖生产中,应用氟胺氰菊酯类药物除螨后,蜂群常出现数量减少、行为异常等现象,给养蜂业造成了巨大损失。尽管已经有文章报道了氟胺氰菊酯对于蜜蜂的不良影响,但尚无关于用药后意蜂工蜂脑组织内mRNA表达特征和功能分析的研究。因此,了解氟胺氰菊酯对蜜蜂脑组织中mRNA的影响,对于解决治螨后蜂群异常的问题至关重要。本研究首先建立了氟胺氰菊酯-动物模型,将6群群势相近的意大利蜜蜂继箱群,随机分成实验组和对照组,每组三个重复,每个处理20只蜂。在用药后的第10天、20天和30天分别进行取样,共取240只蜂样。监测用药后意蜂行为、生理和生态学等方面的异常变化,并将意蜂工蜂脑组织通过高通量测序(HTS)进行转录组特异性RNA测序,应用生物信息学和分子方法进行了分析,以探究氟胺氰菊酯对意蜂的毒性作用机理,研究结果如下:(1)通过转录组测序,我们获得了12个文库的Raw reads 957404012条,经过滤后获得Clean reads 956250750条,Clean reads比例超过99.85%,测序质量良好。(2)经注释,最终共检测到8561个基因在12个文库的脑组织中表达,各测序组间进行两两比较发现,共计546个基因在至少2个分组间显著差异表达。在这些差异表达的基因中,CK-vs-X1D10的上调差异表达最多,共有193个;X1D20-vs-X1D30的上调差异表达最少,为4个。CK-vs-X1D10的下调差异表达最多,为181个;X1D20-vs-X1D30的下调差异表达最少,均为7条。(3)表达模式聚类分析表明,差异基因呈现出4种表达模式(C1、C2、C3、C4)。其中占差异基因总数近半的C2簇差异基因普遍在用药后显著下调,且主要富集到神经活性配体-受体相互作用等功能;而占差异基因总数过半的C3与C4簇基因均在用药后立即显著上调,并在持续用药过程中恢复至对照组水平,这些基因主要富集到各类代谢相关通路。从差异基因的表达模式可以推断,C2簇差异基因与氟胺氰菊酯导致的长期生理功能变化有关,而C3与C4簇基因多与氟胺氰菊酯胁迫造成的短期应激相关。(4)基于KEGG分析中获得显著富集的差异基因,构建了245个基因及它们之间的629对关系组成的共表达网络,并筛选出10个关键基因。关键基因主要参与信号转导、神经系统发育和角膜晶状体形成等生物学过程或通路。其中,关键基因LOC725970表达量在用药后10d、20d、30d均比对照组降低,呈现下调趋势,该基因主要参与调控眼睛发育(eye development)、视觉感知(visual perception)等生物学过程,通过激活肌动蛋白细胞骨架来调节神经突触分化,是视觉发育和维持所必需。本研究分析了意大利蜜蜂工蜂受氟胺氰菊酯药物胁迫后,脑组织中的差异基因随时间变化的表达模式及作用,对差异基因进行了表征和功能分析,从分子水平上探索了蜜蜂秋季狂飞空巢的机制。
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