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茶多酚是从茶叶中提取的30多种多羟基酚类化合物的总称,约占茶叶干重的10%35%,包括儿茶素、黄酮及其苷、花青素、花白素以及酚酸和缩酚酸等,其中儿茶素为茶多酚的主体成分,占茶多酚总量的70%80%。大量研究表明酯型儿茶素在抗氧化、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、防癌、防辐射等药理药效中发挥有重要的作用,因此对儿茶素中起主要作用的酯型儿茶素EGCG和ECG更为关注,其分离成为深入研究与应用的需要。由于儿茶素的结构和性质比较相似,有效地分离制备儿茶素单体具有一定的难度,探寻一种简单易行、经济实惠的酯型儿茶素单体分离制备方法具有重要的现实意义。本文以陇南夏秋茶为材料,研究了茶多酚纯化及酯型儿茶素EGCG和ECG的分离,方法和结果如下:1.通过单因素和正交试验优化了酸性白土吸附脱除咖啡因的工艺,结果显示,酸性白土吸附的最佳工艺条件为:酸性白土用量30g·L-1、吸附时间40min、吸附次数3次和搅拌速率120r·min-1。这几个因素对咖啡因含量影响作用的大小顺序为吸附次数>酸性白土用量>搅拌速率>吸附时间,且吸附次数对咖啡因含量影响显著(P<0.05)。此外,酸性白土吸附茶多酚中的咖啡因后,咖啡因含量由3.68%±0.25%降低为0.06%±0.01%,咖啡因脱除率达98.25%,活性物质儿茶素的含量有所升高,且表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和没食子儿茶素没食子酸酯(GCG)之间未发生明显的同分异构转化。2.通过单因素和正交试验对乙醇沉淀纯化茶多酚的工艺进行了优化,结果显示,乙醇沉淀的最佳工艺条件为:浸提液与乙醇体积比1:4,乙醇浓度100%,醇沉时间6h,醇沉次数2次。这几个因素对茶多酚含量和质量影响作用的大小顺序为乙醇浓度>醇沉次数>体积比>醇沉时间,且乙醇浓度对茶多酚含量和质量影响均显著(P<0.05)。最优工艺下茶多酚含量为54.99%,茶多酚得率为68.46%。3.研究了乙酸乙酯萃取和聚酰胺柱层析富集酯型儿茶素的工艺。结果显示,乙酸乙酯萃取的最佳工艺条件为:浸提液与乙酸乙酯体积比1:1,萃取时间30min,萃取次数2次,浸提液pH5。这几个因素对茶多酚含量影响作用的大小顺序为萃取次数>浸提液pH>体积比>萃取时间,且对茶多酚含量影响均不显著(P>0.05)。这几个因素对茶多酚质量影响作用的大小顺序为萃取次数>体积比>浸提液pH>萃取时间,且萃取次数对茶多酚质量影响显著(P<0.05)。最优工艺下茶多酚含量为89.23%,茶多酚得率为15.56%。聚酰胺柱层析的最佳工艺为:以水、10%、20%、60%乙醇梯度洗脱为最佳洗脱方式,流速4mL·min-1,聚酰胺粒度90目,上样量0.6g。酯型儿茶素的得率为46.7%,EGCG和ECG的含量分别为65.8%和27.7%。4.研究了中低压液相色谱分离酯型儿茶素单体EGCG和ECG的工艺。结果显示,中低压液相色谱的最佳工艺条件为:选用乙醇作洗脱剂,流速6mL·min-1,梯度洗脱02CV:水;24.5CV:10%乙醇;4.57CV:45%乙醇;78.5CV:10%乙醇;8.511.5CV:80%乙醇,上样量0.6g。通过高效液相色谱和红外光谱对酯型儿茶素单体进行检测,结果表明,EGCG和ECG的纯度分别为95.6%和92.8%,提取率分别为90.8%和89.6%。