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在世界范围内,子宫颈癌（Cervical Cancer）是严重威胁妇女健康的主要恶性肿瘤之一。发病率居女性恶性肿瘤的第二位,近年来宫颈癌的发病率逐步上升且趋于年轻化,早期筛查宫颈癌前病变可阻断宫颈癌的发生,目前宫颈癌筛查的主要手段是细胞病理学检查和高危型人乳头状瘤病毒（high risk human papillomavirus,HR-HPV）检测。细胞病理学检查敏感性一般在55%～80%左右,但一旦发现异常细胞,特异性可达到90%以上。HPV检测虽敏感性高,但特异性一般在30%左右,这是由于大多数HPV阳性的病人可自然转阴,并不一定进展为宫颈癌。因而,从宫颈癌筛查及早期诊断角度出发,迫切需要其它可靠指标或手段来协助以上检查,使筛查更准确、可靠及更有预测性。宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoasia,CIN）发展到宫颈浸润癌需要经过一个较长的阶段,并且低级别宫颈上皮内瘤变绝大多数都可自然回退,仅极少部分进展为癌。近年来的研究表明,人类大多数肿瘤细胞,特别是实体肿瘤细胞,常表现为染色体不稳定性（chromosome instability,CI）,即染色体数目的改变和染色体结构异常。宫颈细胞由非典型性发育异常向宫颈癌转变的过程中几乎都伴有3号染色体长臂扩增。其中,涉及到的最重要的基因可能是人类染色体端粒酶RNA亚单位（Humantelomerase RNA component,hTERC）基因。该基因的扩增可阻止细胞凋亡,导致肿瘤产生。因此,hTERC基因的异常扩增可能是宫颈癌形成的早期事件。本研究利用荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH）方法,通过检测正常宫颈及不同级别上皮内病变患者宫颈脱落细胞内hTERC基因的表达,探讨hTERC基因在子宫颈癌发生、发展进程中所起的作用,为子宫颈癌的筛查及早期诊断提供依据。材料和方法1.研究对象选取2008年6月至2009年1月郑州大学第三附属医院妇科门诊和住院患者共100例,选取2008年3月至2009年3月河南省肿瘤医院妇科门诊和住院患者共79例,收集其宫颈脱落细胞标本。纳入标准:所有研究对象均签署知情同意,同时须有组织病理学结果,按照宫颈上皮内瘤样病变诊断处理规范分为CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级,宫颈癌诊断按照《妇产科学》第六版诊断标准。排除标准:除外先天性遗传病、妊娠、生殖道急性炎症和严重内科疾病患者。患者年龄21～61岁,平均36.89±8.72岁。所有患者均行阴道镜检查,并经阴道镜下取活检,常规送病理检查。2.实验方法采用液基细胞技术TCT(ThinPrep?Cytology Test)方法采集宫颈脱落细胞,按照2001版的TBS（The Bethesda System）系统进行细胞病理学诊断,分为未见上皮内病变或恶性细胞（Negative for Intraepithelial Lesion or Malignancy,NILM）,无明确诊断意义的非典型鳞状上皮细胞（Atypical Squamous Cells of Undetermined Signification,ASC-US）、非典型鳞状上皮细胞不除外高度鳞状上皮内病变（Atypical Squamsuscells-Cannot exclude HSIL,ASC-H）、低度鳞状上皮内病变（Low-grade squamousIntraepithelial Lesion,LSIL）、高度鳞状上皮内病变（High-grade squamous IntraepithelialLesion,HSIL）和宫颈癌标本。利用薄层液基细胞学技术,用其剩余标本5～10ml细胞悬液进行FISH操作,检测不同级别上皮内病变及宫颈癌患者脱落细胞内hTERC基因的表达。采用二代杂交捕获（Hybrid Capture 2,HC2）技术方法检测高危型HPV感染情况。3.统计学分析所有数据均采用SPSS11.5进行处理,多样本均数比较采用t检验,率和构成比之间的比较采用x2检验,以α=0.05作为检验水准。两种诊断方法的比较采用ROC曲线分析。结果1.细胞学异常组（ASCUS组、LSIL组、HSIL组、鳞状细胞癌组）与正常细胞学对照组比较,hTERC基因阳性率差异有显著统计学意义（P＜0.001）。2.HSIL组、宫颈癌组hTERC基因阳性率分别显著高于ASCUS组与LSIL组（P＜0.001）。3.CINⅡ/Ⅲ组和宫颈癌组的hTE、RC阳性率均显著高于正常对照组,（P＜0.001）。且CINⅡ/Ⅲ组和宫颈癌组的阳性率显著高于CINⅠ组,P值分别为0.0004和0.0001。4.ASC-US、ASC-H、LSIL、HSIL以上组中高危型HPV DNA阳性率分别为54.8%（17/31）、75.0%（3/4）、60.7%（17/28）和92.3%（12/13）,HSIL以上组高危型HPVDNA阳性率明显高于ASC-US组（P＜0.05）,ASC-US、ASC-H、LSIL之间相比则差异无显著性（P＞0.05）。5.以组织病理学诊断为金标准,将CINⅡ及其以上诊断定为阳性,利用ROC曲线比较FISH法检测hTERC基因和细胞学结合TBS分级预测CINⅡ/Ⅲ以上患者的敏感度和特异度。以LSIL为界点,细胞学检测CINⅡ及其以上患者的敏感度为76.8%,特异度为93.7%;以阳性细胞＞8%为界点,FISH法检测CINⅡ及其以上患者的敏感度为79.8%,特异度为83.4%。细胞学和FISH法的ROC曲线下面积分别为:0.913和0.862,二者相比无显著性差异。结论1.随细胞学病变程度增加,hTERC基因阳性表达率具有增加趋势。2.端粒酶hTERC基因的扩增与宫颈癌发生、发展具有相关作用。3.FISH技术检测上皮内病变和细胞学相比在总体的敏感度和特异度上无显著性差异。但用两种方法作为初筛CIN均有较高价值,两者结合将提高宫颈病变的检出率。4.在高度上皮内瘤变及宫颈癌中,hTERC基因存在高度表达,hTERC基因检测可作为预测HSIL及宫颈癌的独立指标。5.高危型HPV感染和宫颈上皮内瘤变关系密切,随着病变程度增加HPV感染率逐渐增高,其检测可以作为宫颈癌筛查的重要指标。