亚砷酸钠对体外培养正常人肝细胞损伤的剂量反应关系研究

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目的:探讨亚砷酸钠(NaAsO2)对正常人chang liver细胞存活率以及凋亡率的影响,观察砷对抗氧化酶的影响,以及砷对HGF、Nrf2和bax基因RNA表达的影响,寻找出砷对体外培养正常肝细胞损伤的剂量-反应(效应)关系。  方法:不同浓度(0.2、2、5、10、15、20、25、50、75、100μmol/L)亚砷酸钠(NaAsO2)作用于正常人 chang liver细胞不同的时间(24h、48h、72h、96h),采用 MTT还原法检测细胞生长情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况;微量酶标法检测微量还原型谷胱甘肽(GSH)的含量;可见光法检测过氧化氢酶(CAT)的活力;WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)的活力;比色法检测谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)的活力;Real-time PCR法检测HGF、Nrf2和bax RNA的表达,结合数学模型探讨砷对正常人chang liver细胞损伤的剂量反应关系。  结果:与对照组相比较,随着砷染毒剂量的升高,染毒组存活率低于对照组(P<0.05)也存在一定的时间-剂量依赖性;染毒组凋亡率随着砷染毒剂量的升高而升高(P<0.05);chang liver细胞的SOD活力以及GSH的含量随着砷染毒剂量的升高而降低(P<0.05);在染毒24h、48h时,GSH-Px活力随着染砷剂量升高而降低,但仅有75、100μmol/L差异有统计学意义,在染毒72h,GSH-Px活力随着染砷剂量升高而降低(P<0.05);在染毒24h、72h时,CAT活力随着染砷剂量升高而降低,但仅有75、100μmol/L差异有统计学意义;染毒48h,CAT活力随着染砷剂量升高而降低(P<0.05),染毒24h、48h,CAT活力仅有100μmol/L染毒组差异有统计学意义;在与对照组比较,染毒组的HGF、Nrf2mRNA的表达随着砷染毒剂量的增加而下调,Bax基因的mRNA表达显著上调(P<0.05)。拟合亚砷酸钠对肝细胞损伤的剂量反应关系的回归模型时,拟合出 logistic曲线、线性、对数曲线、复合曲线、三项式曲线和S曲线回归模型。  结论:亚砷酸钠有明显的细胞毒性,能够抑制chang liver细胞的增殖,一定砷染毒剂量能够降低SOD、GSH-Px、CAT的活力、GSH的含量,降低抗氧化的能力;一定剂量的砷染毒剂量下调 HGF、Nrf2基因的表达量,上调 Bax基因的表达量,这可能加速细胞的凋亡;不同的时间段拟合的剂量反应关系模型不同,拟合出同种模型的R2值也不同。
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