红三叶草也称红车轴草（Trifolium pretense）,为豆科三叶草属多年生草本植物。研究表明岷山红三叶不仅可以作为优良的牧草,而且是重要的药材,含有丰富的异黄酮类物质,如芒柄花素、鹰嘴豆芽素A、红车轴草素、大豆素等,具有大豆异黄酮类似的药用与保健作用.。本试验以岷山红三叶为材料,通过红三叶草粉末的乙醇浸提,乙醇粗提物的乙酸乙酯萃取,以及乙酸乙酯提取物的大孔树脂分离纯化等步骤,结合HPLC的分析检测手段,最终得到杂质大为减少异黄酮产品,异黄酮纯度达到50%以上。通过正交试验分析确定,影响红三叶异黄酮浸提回收率的关键因素是乙醇的浓度,影响异黄酮纯化的关键因素是盐酸的浓度,并最终选用乙醇和乙酸乙酯分别作为浸提和纯化的溶剂。乙醇浸提选用L₃（3⁴）正交实验,确定从红三叶草提取异黄酮的最佳工艺条件是:乙醇浓度75%,提取温度70℃,乙醇用量10倍（V/W）,浸提时间1小时。乙酸乙酯萃取也选用L₃（3⁴）正交实验,确定从乙醇浸膏得到异黄酮粗品的最佳工艺是:反应盐酸浓度3%,反应温度60℃,用于溶解浸膏的3%碱用量为4倍（V/W）,反应时间为1小时。对于乙酸乙酯提取物的进一步纯化。研究表明,AB-8树脂对红车轴草异黄酮不仅吸附量大,而且解吸率高,适合红车轴草异黄酮的分离富集。AB-8树脂分离红车轴草异黄酮的工艺参数为:上柱液浓度0.8-4mg/mL,pH8.5,流速2BV/h。以4-6倍树脂床体积的70-80%乙醇以2BV/h流速进行洗脱,可基本上将红车轴草异黄酮从树脂上解吸下来,收集其中浓度最集中部分,经HPLC检测,其异黄酮浓度超过50%,杂质大为减少,通过冷冻干燥就能得到含量达50%以上的异黄酮干品。