【摘 要】
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研究背景:非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及肝纤维化是当今临床面临的巨大挑战,目前尚无有效防治方法。因此,探寻NASH及肝纤维化防治的新靶点及新策略显得尤为重要。基于靶向肝星状细胞（HSC）可治疗肝纤维化及表观机制在HSC激活中的关键作用,通过构建基于细胞的高通量筛选方法,筛选表观抑制剂库中的小分子化合物,前期筛选研究发现HDAC抑制剂givinostat可强力抑制HSC激活,提示givinosta
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（ 81070344,21472208,81625022）；
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研究背景:非酒精性脂肪性肝炎（NASH）及肝纤维化是当今临床面临的巨大挑战,目前尚无有效防治方法。因此,探寻NASH及肝纤维化防治的新靶点及新策略显得尤为重要。基于靶向肝星状细胞（HSC）可治疗肝纤维化及表观机制在HSC激活中的关键作用,通过构建基于细胞的高通量筛选方法,筛选表观抑制剂库中的小分子化合物,前期筛选研究发现HDAC抑制剂givinostat可强力抑制HSC激活,提示givinostat可能对NASH及肝纤维化具有治疗作用。目的:（1）探讨givinostat对四氯化碳（CCL4）诱导小鼠肝纤维化的影响及机制;（2）探讨givinostat对小鼠NASH及相关肝纤维化的影响及机制。方法:以转化生长因子-β（TGF-β）诱导肝星状细胞系LX2作为HSC激活的细胞模型,以RAW 264.7作为炎症细胞模型;分别以CCL4和胆碱/蛋氨酸缺乏饲料（MCD）或高脂饮食（HFD）喂养构建2种肝纤维化小鼠模型;运用生化检测、细胞组织病理学、高通量测序及分子生物学检测givinostat干预对HSC激活、NASH及肝纤维化的影响及机制。结果:（1）与模型组相比,免疫组化及Western blot检测显示:givinostat可在体内外显著抑制HSC a-SMA和col1a基因表达,生化检测及组织病理学显示:givinostat干预可明显改善CCL4诱导的小鼠肝纤维化;高通量测序及RT-q PCR验证DMKN、MSLN和UPK3B是givinostat阻断HSC激活过程中下调最显著的三个基因,Knockdown DMKN、MSLN和UPK3B也显示可显著抑制TGF-β诱导的HSC激活;（2）与模型组相比,Western blot及RT-q PCR显示:givinostat干预可显著提高巨噬细胞组蛋白H3、H4乙酰化水平,抑制肝巨噬细胞和NASH肝组织促炎细胞因子及趋化因子表达;降低NAS评分及改善NASH相关肝纤维化;高通量测序显示:givinostat干预最显著的信号通路涉及代谢和炎症,givinostat可抑制炎症相关基因如TNF-a、MCP-1、IL-6、CXCL2、CCL5及脂肪酸合成基因FAS、SREBP-1C、SCD1表达;上调脂肪酸β氧化相关基因如CYP7A、ACOX1、COX5a、UCP2及PDK4表达。结论:（1）givinostat可通过上调组蛋白乙酰化水平,抑制HSC DMKN、MSLN和UPK3B基因表达,阻抑HSC激活,改善CCL4诱导的小鼠实验性肝纤维化;（2）givinostat可通过抑制肝细胞脂肪酸合成,促进脂肪酸β氧化,抑制肝巨噬细胞促炎细胞因子及趋化因子表达,减轻肝组织炎症和脂肪变,阻抑HSC激活,由此改善NASH及相关肝纤维化,提示givinostat有潜力成为防治NASH及肝纤维化的创新型药物。
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