聚丙烯胺接枝介质及其改性介质的蛋白质层析行为研究

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接枝型层析介质在离子交换层析中通常具有很高的吸附容量和传质速率。为了开发具有高平衡吸附容量、高传质速率、高动态吸附容量、具有良好洗脱性能的层析介质,本文围绕聚丙烯胺(PAA)接枝介质做了一系列研究,并将介质改性,进一步提高介质的性能的同时拓展了介质应用范围,同时丰富了对层析机理的认识。首先将900 k Da PAA接枝到琼脂糖基质上,以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白研究介质的层析性能。这种介质的最大吸附容量和传质速率分别336 mg/m L和0.42,比17.5 k Da PAA接枝介质的最大值分别高24%和1.5倍。介质FF-PAA-L740在0-750 mmol/L Na Cl的盐浓度范围内始终能保持很高的吸附容量和传质速率,耐盐性超出此前所有离子交换介质。在线性梯度洗脱实验中,介质表现出很高的蛋白质回收率(>97%)和重复利用稳定性。然后选取了另外两种分子量(160 k Da和450 k Da)的PAA制备层析介质,研究对BSA和γ-球蛋白吸附行为的区别,并与17.5 k Da和900 k Da PAA接枝介质进行比较。对于BSA的吸附,配基分子量适中的两种介质表现出更好的吸附和传质性能,最大吸附容量和传质速率分别达到328 mg/m L和0.715。对于γ-球蛋白的吸附,介质配基的分子量越小,其接枝介质的吸附容量越大;传质系数随着配基分子量的增加呈现出先增大后减小的趋势。对γ-球蛋白的吸附过程凸显了空间位阻效应的作用。此后,在PAA接枝介质的基础上修饰不同密度的乙酸钠。随着乙酰基修饰密度的增加,介质离子交换容量减小,介质的吸附容量和传质速率均大幅提升,比未修饰的介质最多分别增长40%和2倍以上。修饰乙酸钠后介质对于盐的耐受性明显降低,柱洗脱所需要的盐浓度随之降低。以PAA接枝介质为基础,修饰琥珀酸酐,使介质由阴离子交换剂转变为阳离子交换剂,以溶菌酶为模型蛋白进行研究。介质的固相吸附密度随着离子强度的增加而降低,传质系数随着离子强度的增加先增大后减小。介质在不同盐浓度条件下对溶菌酶的最高吸附容量和传质速率分别为450 mg/m L和0.549,在适宜的操作条件下仍然具有很好的色谱性能。本研究开发了一系列具有优良层析性能的PAA接枝介质及其改性介质,进一步丰富了蛋白质层析介质的应用。
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