免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是一种以抗体和抗原之间的特异性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的常规方法,可用来确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的存在与否。针对免疫共沉淀检测方法相对繁琐、操作误差大、结果不易数字化等弱点,本文第一部分建立了一种基于芯片的免疫共沉淀技术检测蛋白-蛋白相互作用的分析方法,该方法结合传统的免疫共沉淀和蛋白质阵列芯片技术的优势,快速检测蛋白-蛋白之间的相互作用。此方法将nl级的anti-Flag M2抗体固定在醛基修饰的芯片表面,利用重组蛋白的表位标签将带有Flag诱饵蛋白和Myc猎物蛋白的细胞裂解液在芯片上进行免疫沉淀反应,通过荧光标记的anti-Myc抗体检测免疫共沉淀的蛋白,采用荧光芯片扫描仪可获得蛋白-蛋白相互作用的信号。本文第二部分介绍一种可视化免疫共沉淀芯片检测技术。在免疫共沉淀芯片技术的基础上结合银染色放大和免疫胶体金技术实现了可视化检测。该方法无需借助昂贵的检测仪器即可观察到相互作用信号。通过生物素与链亲和素的强结合能力使样品标记上胶体金,最后使用银增强显色液显色,一旦银增强试剂加入,样品点上的胶体金则作为一个催化试剂催化银离子的还原反应发生。被还原出来的银以胶体金为沉积位点不断的积聚直到出现肉眼明显可见的黑色信号。可视化免疫共沉淀芯片检测技术为我们提供了一个检测蛋白-蛋白相互作用的有效平台,该技术快速、灵敏、可实现高通量的检测。使用银增强显色技术使结果可视化,避免了使用价格昂贵的荧光扫描仪。本文第三部分我们成功地将酪胺信号放大系统和银增强方法相结合,开发出一种蛋白芯片的高灵敏度的显色检测方法。利用目标分子团上的HRP酵素将带有被生物素标记过的Tyramide催化后形成自由基,此自由基会与目标分子附近的Tyrosine结合,导致每一个目标分子团上有多个被标记过的Tyramide,从而达到信号放大的效果。研究实验通过双抗夹心的模式,对各项实验参数进行了优化,其中包括固定抗体的浓度,检测抗体的浓度,链亲和素标记的辣根过氧化物酶的稀释倍数和反应时间,生物素标记的酪胺的稀释倍数和反应时间,链亲和素标记的胶体金的稀释倍数和反应时间,实现了样品的量化分析检测。实验表明了通过酪胺信号放大和银增强方法将检测信号两次放大,大大提高了检测的灵敏度,可以达到良好的检测效果。该技术可为临床标志物的检测提供一种潜在的高灵敏度新型检测方法。