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在哺乳动物中的许多研究表明,各种诱导因素,如:抗癌药物、除去生长因子和细胞因子等引起凋亡时,线粒体和内质网中都会经历一系列的变化,而在昆虫细胞中这个方面的研究比较少.该实验以杆状病毒SfaMNPV诱导的斜纹夜蛾SL-1细胞凋亡系统为材料研究了病毒感染对昆虫细胞的线粒体和内质网的影响.完成的工作包括以下几个方面:(1)细胞内线粒体的变化通过MTT法研究病毒感染对细胞线粒体功能的影响,同时用流式细胞仪和共聚焦激光显微镜研究线粒体膜电位(△ψm)的变化,western检测2种凋亡调控蛋白cyto c和Bcl-2蛋白的变化.结果表明,在接种病毒后的8h时SL-1细胞的线粒体出现了功能的变化,随着时间的延长,功能逐渐降低且呈时间依赖性.细胞经罗丹明(Rh-123)染色后在流式细胞仪上检测,病毒感染后SL-1细胞在4h后即出现了荧光强度的下降,说明此时膜电位已经开始下降,以后随着病毒入侵、复制、脱壳等过程的完成,细胞膜电位逐渐下降且呈时间依赖性.(2)钙离子的检测1、细胞内质网是[Ca<2+>]<,i>的主要储存场所,以及[Ca<2+>]<,i>在细胞凋亡的信号转导通路中所具有的重要作用,该实验研究了SfaMNPV诱导SL-1细胞凋亡过程中细胞内[Ca<2+>]<,i>的变化以及[Ca<2+>]<,i>可能在凋亡信号转导通路中的意义.2、为研究胞质内游离Ca<2+>]升高、胞外钙离子内流以及内质网钙库Ca<2+>排空三种因素在SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡过程中的功能意义,在实验过程中分别建立了两种不同的钳制状态,细胞质Ca<2+>钳制状态(用7 μMBAPTA/AM、110 μM CaCl<,2>钳制胞质内的Ca<2+>)和用EGTA阻断胞外Ca<2+>的内流,然后研究了两种处理条件对SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡的影响.经细胞经流式分析和梯形带等定性及定量检测显示,两种处理条件均未能抑制SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡,即胞质内游离Ca<2+>升高和胞外钙离子内流都不是诱导细胞凋亡的主要诱因,提示内质网钙库Ca<2+>排空是SfaMNPV诱导的SL-1细胞凋亡信号转导通路中的主要媒介.