【摘 要】
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羔羊生产是肉羊养殖的基础环节,对其小肠生长发育的研究主要集中于形态学和消化酶活性变化,但对不同吮乳日龄羔羊小肠上皮细胞内行使胞内消化的溶酶体（Lysosome）的形态和功能缺乏了解,特别是其动态变化未见报道。本研究将16只（2.77±0.08 kg）湖羊新生羔羊随机分为30日龄组（EEW-30）、45日龄组（EW-45）、60日龄组（NW-60）和75日龄组（SC-75）4组,每组4只。采用透射电
【基金项目】
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自治区重点研发计划项目“肉羊安全高效生产关键技术集成研究”的部分研究成果 （项目编号:2017B01005-2-4）,课题主持人:姚刚 教授；
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羔羊生产是肉羊养殖的基础环节,对其小肠生长发育的研究主要集中于形态学和消化酶活性变化,但对不同吮乳日龄羔羊小肠上皮细胞内行使胞内消化的溶酶体（Lysosome）的形态和功能缺乏了解,特别是其动态变化未见报道。本研究将16只（2.77±0.08 kg）湖羊新生羔羊随机分为30日龄组（EEW-30）、45日龄组（EW-45）、60日龄组（NW-60）和75日龄组（SC-75）4组,每组4只。采用透射电镜、免疫组织化学染色、Western Blot、荧光定量PCR以及ELISA等方法技术,观察各组羔羊小肠上皮细胞溶酶体的形态和位置,测定溶酶体相关性膜蛋白（Lysosomal-associated membrane protein 1/2,LAMP1/2）LAMP1和LAMP2基因m RNA和其蛋白相对表达量,分析胞内消化功能变化与小肠腔内消化酶活性的相关性。主要研究结果如下:1.透射电镜观察发现溶酶体大多位于肠上皮吸收细胞顶端区域。大量呈致密小体状的初级溶酶体多见于十二指肠,而内吞大囊泡（次级溶酶体）多见于空肠和回肠。免疫组织化学染色定位可见肠绒毛顶端上皮细胞的溶酶体相关性膜蛋白LAMP2表达较高。2.比较各组小肠相同肠段LAMP1基因m RNA表达量发现,十二指肠可见EEW-30组显著低于SC-75组（P<0.05）;空肠可见EEW-30组极显著低于EW-45组（P<0.01）。比较相同日龄羔羊小肠各段的LAMP1基因m RNA表达量发现,EEW-30组和EW-45组均可见空肠极显著高于十二指肠和回肠（P<0.01）。LAMP2基因m RNA表达量无显著差异（P>0.05）。比较各组小肠的LAMP1蛋白相对表达量发现,空肠可见NW-60组羔羊极显著低于SC-75组（P<0.01）。相同日龄羔羊小肠的LAMP1蛋白相对表达量可见,SC-75组的空肠极显著高于回肠和十二指肠（P<0.01）。比较不同日龄组小肠LAMP2蛋白相对表达量发现,十二指肠和空肠可见EW-45组和NW-60组极显著高于EEW-30组和SC-75组（P<0.01）;回肠可见NW-60组均极显著高于其余三组（P<0.01）。相同日龄羔羊小肠的不同肠段比较LAMP2相对蛋白表达量发现,30、45和60日龄组均可见十二指肠显著高于回肠（P>0.05）。45、60和75日龄组均可见空肠极显著高于回肠（P<0.01）。3.不同肠段LAMP2蛋白的相对表达量,在30日龄时与蔗糖酶和脂肪酶活性呈显著的中等强度正相关（R2=0.506,P=0.0095和R2=0.463,P=0.015）,与淀粉酶活性呈极显著的中等强度负相关（R2=0.583,P=0.004）。在45日龄时与淀粉酶和蛋白酶活性呈显著的中等强度负相关（R2=0.451,P=0.017和R2=0.338,P=0.048）。在60日龄时与脂肪酶活性呈显著的中等强度正相关（R2=0.496,P=0.011）。在75日龄时与淀粉酶活性呈极显著的中等强度负相关（R2=0.73,P=0.0004）,与蛋白酶活性呈显著的中等强度负相关（R2=0.457,P=0.016）。而相同日龄羔羊小肠的不同肠段的LAMP2蛋白相对表达量仅与十二指肠的蔗糖酶活性呈显著的中等强度负相关（R2=0.279,P=0.035）。以上结果表明,吮乳羔羊小肠上皮胞内溶酶体由其相关性膜蛋白LAMPs表达差异所体现出的胞内消化呈现出十二指肠到回肠递减的趋势。比较不同日龄组小肠相同肠段可见小肠上皮细胞内消化随日龄增长而增强。LAMP2蛋白相对表达量所体现的胞内消化与小肠腔内蔗糖酶和脂肪酶活性呈正相关,与蛋白酶、淀粉酶和蛋白酶活性呈负相关。两者主要与小肠部位相关,受日龄影响较小。
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