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恶性肿瘤是严重威胁人类生命和健康的疾病,而化学药物治疗越来越成为治疗肿瘤的重要手段。近年来,筛选高效低毒的抗肿瘤药物,特别是从天然产物中筛选抗肿瘤新药,是抗肿瘤药物研究的热点。 海洋是一个多样化合物的世界,是人类寻找抗肿瘤新药的最大宝库。由于大多数海洋生物活性物质是独特而且未知的,很难通过定向筛选来获得,而往往进行随机筛选,因此能否建立灵敏、方便、快捷的筛选模型将对实验的成败起着决定性的作用。 我们创建了镰刀菌初筛模型,并将其与肿瘤细胞毒复筛模型组合,应用于海洋生物抗肿瘤活性物质的筛选。镰刀菌模型方便快捷,从加样到观察只需16h,是一理想的初筛模型,在海洋抗肿瘤、抗真菌药物的跟踪筛选方面,有着广阔的应用前景;而作为一种细胞毒检测方法,MTT比色法是一种灵敏、准确的经典方法。二者的组合模型具有样品处理量大、便捷、费用低的优点,可用于海洋抗肿瘤活性物质的大规模筛选。 从海南16个地区采集到的86个海洋环境样品中,分离得到纯菌株1585株,其中细菌552株(34.8%),放线菌683株(43.1%),真菌350株(22.1%)。分离出的纯菌株经发酵培养后,得到的发酵产物即是待筛的微生物样品。 通过建立的抗肿瘤活性物质组合筛选模型对1585个微生物样品进行逐步筛选,结果发现有12个微生物样品对体外培养的肿瘤细胞具有很强的抑制作用。其中有一株抗肿瘤活性最强的细菌菌株QKⅠ-2708,其发酵产物QK1-2708对CNE、SMMC-7721和S180细胞的ID50分别是3520、3078、4103。同时检测结果还表明,发酵液TM4-5517和YG6-7019对CNE细胞具有较强的选择性抑制作用,而NN7-5426则对SMMC-7721细胞具有较强的选择性抑制作用。 海洋动植物样品分别以水、无水乙醇或乙酸乙酯粗提后,用组合筛选模型进行抗肿瘤活性的检测。结果发现第11、12号样的乙醇和乙酸乙酯提取物对CNE、SMMC-7721和S180细胞的IC50均小于10μg/mL,表现出了较强的抗肿瘤活性。 对发酵液QK1-2708中抗肿瘤活性物质的理化性质进行研究。结果表 中国邢带农业科学院华南热帝农业大学2002 i硕土论文明,该活性物质具有较强的热稳定性,它对CNE细胞的*。,60’C处理1小时后只减少16.l%,100℃处理后也才降低40.8%。()KI-2708中的抗肿瘤活性物质耐酸性较好,而且在州.0~Pfl7.0范@呐最为稳定;不过此活性物质在过碱时容易失活,在PH 11处理24h后ID;。快速下降为29.:t%。 另外,海水培养基发酵液的抗肿瘤活性和菌体生物量均比蒸馏水培养基发酵液高得多,这表明 QK-2708菌株极有可能是来源于海洋的细菌。 形态学特征和生理生化特征研究的结果表明,QK-2708菌株可能是棒状杆菌属的一个新种。 QK刁708菌株及其发酵液叫《708的初步研究表明,该菌株开发前景-十分广阔。