金针菇免疫调节蛋白(FIP-fve)是从金针菇中提取的一种蛋白质,具有免疫调节、刺激机体产生细胞因子等生理功能,能促进细胞中核酸和蛋白质的合成,并且对过敏反应有抑制作用。本项研究的主要目的是探索FIP-fve的提取方法,并对金针菇的子实体及金针菇菌柄基部中的FIP-fve的含量进行研究,为金针菇的有效利用提供科学依据。本研究首先通过硫酸铵盐析法、离子交换层析等方法研究FIP-fve的提取条件,并用血凝实验、SDS-PAGE、凝胶过滤层析等方法进行分离纯化,并对金针菇的子实体及金针菇菌柄基部中FIP-fve的含量进行研究。主要结果如下:(1)用5%的醋酸作为提取剂,经细胞粉碎、盐析等步骤,从金针菇子实体中提取FIP-fve粗提物,并对其进行血凝试验分析,结果表明最低有效活性浓度为25μg/mL。从500g新鲜金针菇子实体中,可分离得到FIP-fve粗提物1.82g,提取得率为 0.364%。(2)用阴离子交换层析对FIP-fve粗提物进行分离,得到F1—F6等6个组份。血凝试验结果表明,只有F3组份具有促进红细胞凝集的作用,其最低有效活性浓度为6.25 μg/mL,表明F3组份中含有FIP-fve。(3)SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳分析结果表明,F3组份仅显示单一泳带,其相对分子量为13KDa,与FIP-fve的相对分子量相符。(4)凝胶过滤层析分析结果表明,F3组分仅显示单一的峰,其天然分子量约为26KDa,表明F3组分中仅含有一种蛋白,该蛋白是由分子量为13KDa的两个单体构成的二聚体,符合FIP-fve的结构特点。(5)F3蛋白具有明显的促进红细胞凝集的作用,其亚基和天然分子的分子量分别为13KDa和26KDa,且具有二聚体结构等特点,F3蛋白即为FIP-fve。从每500g新鲜金针菇子实体中,可分离得到FIP-fve 18mg,提取得率为0.0036%。(6)用上述提取FIP-fve粗提物的方法,从500g金针菇菌柄基部提取FIP-fve粗提物2.63g,其提取得率为0.526%,表明比金针菇子实体FIP-fve粗提物的提取得率高 44.51%。(7)用阴离子交换层析分离金针菇菌柄基部FIP-fve粗提物,得到与金针菇子实体FIP-fve粗提物同样的F1—F6等6个组份。血凝实验分析结果表明,只有F3组份具有促进红细胞凝集的作用,其最低有效活性浓度为3.13 μg/mL。500g金针菇菌柄基部样品中可提取到29mg的F3组份,提取得率为0.0058%,较金针菇子实体高61.1%。