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背景与目的：细胞内存在多种蛋白质共价修饰方式，如乙酰化、磷酸化、泛素化、甲基化等，它们对蛋白质发挥正常的生物学功能起着重要作用。近些年来几种小的类泛素蛋白(ubiquitin-like proteins，Ubls)接连被发现，它们与泛素在二级结构上极其相似，且催化修饰过程的酶体系也具有很高的同源性，SUMO(smallubiquitin-related modifier)就是其中的重要成员之一。SUMO不像泛素化与底物结合来降解底物，而是通过蛋白质间的相互作用完成SUMO化修饰(sumoylation)。SUMO化修饰调节多种生物学的过程，包括核质转运，转录活性调解，DNA修复和复制，以及有丝分裂和减数分裂时染色体的行为。研究发现能被SUMO被其修饰的蛋白有百余种，例如RanGAP1，PML，IkBα，c-Jun和p53等。SUMO共价连接需要E1活化酶(Aos1/Uba2)，E2结合酶(Ubc9)，以及多种E3连接酶如PIAS家族、核孔蛋白RanBP2和Pc2。作为唯一一种E2酶Uboc9对sumoylation的生物过程至关重要。本研究构建含Ubc9基因的病毒表达载体，转染包装细胞后使其产生病毒，收集病毒感染靶细胞，使细胞中的Ubc9基因过表达，以便于深入研究Ubc9基因对细胞的作用。
方法：
1.聚合酶链反应(PCR)扩增获取目的基因Ubc9，定向插入逆转录病毒表达载体pMSCVneo，形成重组质粒pMSCV-Ubc9；脂质体法将pMSCV-Ubc9转染逆转录病毒包装细胞PT67；G418筛选产毒细胞克隆，扩大培养产毒细胞克隆，收获病毒感染BMSC细胞。用Western blot方法检测Ubc9在BMSC细胞中的表达。
2.把Ubc9基因定向插入腺病毒表达载体。pemⅠ酶切将穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9线性化；线性化的穿梭质粒pAdTrack-CMV-Ubc9与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在感受态BJ5183菌内进行同源重组，筛选阳性重组子pAdEasy-1/Ubc9；再用PacⅠ酶切pAdEasy-1/Ubc9使之线性化，线性化的腺病毒质粒经脂质体转染HEK293细胞，进行重组腺病毒的包装和扩增。收集重组腺病毒，感染HeLa，用Western blot方法检测Ubc9在HeLa细胞中的表达。
结果：
1.限制性酶切和测序鉴定证实Ubc9正确插入逆转录病毒表达载体。G418筛选获得稳定产毒的抗性细胞克隆，收获病毒能有效感染BMSC细胞。
2.通过PacⅠ酶切证实携带Ubc9基因的腺病毒载体构建成功，包装出携带Ubc9基因的腺病毒能有效感染HeLa细胞。
结论：携带Ubc9基因的病毒表达载体构建成功，转染包装细胞后能包装出病毒颗粒，收集的病毒能有效感染靶细胞。用Western blot方法检测Ubc9在靶细胞中可高表达。