胆管癌（Cholangiocarcinoma,CCA）是一种具有高侵袭性和高致死率的癌症。对于不可切除的或转移的CCA患者,以吉西他滨和顺铂为主的化疗是首先治疗方式。但由于多种抗药机制,包括:局部血药浓度不足;低剂量化疗药物会促进恶性肿瘤生长等,使得临床结果令人十分失望。由于纳米材料能够通过被动和主动靶向作用来改善药物携带的功效,使得纳米药物在肿瘤的靶向治疗中越来越受欢迎。在这里,我们将肝素（一种天然多糖）自组装成纳米颗粒;与传统的纳米药物设计不同,肝素纳米颗粒（folate-heparin nanoparticles,FH NPs）上没有化学毒性成分。研究结果显示FH NPs没有细胞毒性,同时我们发现FH NPs相较于顺铂能更有效地抑制CCA肿瘤的生长和转移,并且没有产生可观察到的毒副作用。研究还证实了FH NPs能够有效地抑制由低剂量吉西他滨引起的肿瘤耐药。本研究以FH NPs为研究重点,探索其在治疗胆管癌方面的作用和具体机制。本课题首先在制备出FH NPs后对其毒副作用展开研究。发现其不影响大鼠的凝血功能;相较于其他化疗药物,FH NPs对肝肾功能几乎没有影响,体外实验发现治疗剂量的FH NPs能够显著抑制肿瘤的生长和转移。我们随后对FH NPs抑制胆管癌的分子机制进行了探讨。我们发现FH NPs能够作用于肿瘤微环境,抑制肿瘤细胞分泌的血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）,从而抑制新生血管的形成。同时FH NPs能够抑制由转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）诱导的上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）现象,从而抑制了肿瘤的生长和转移。肿瘤细胞干性和EMT密切相关,我们观察到FH NPs能够显著抑制干性相关蛋白的表达,提示其可能通过抑制细胞干性从而抑制肿瘤的发生发展。不同于一般的化疗药物,FH NPs不会直接导致细胞死亡,而是诱导肿瘤细胞衰老从而抑制肿瘤的生长。化疗药物局部血药浓度不足是化疗过程中难以避免的现象,有研究发现,低浓度的化疗药物不仅不能治疗肿瘤,可能促进癌症的发生发展。我们随后建立了低剂量吉西他滨处理胆管癌的细胞和动物模型。结果显示低剂量的吉西他滨能够促进肿瘤细胞的生长转移和干性的增强。FH NPs能够显著缓解这一现象。为了进一步深入研究,我们猜想FH NPs通过升高PTEN蛋白从而起到治疗的作用。为了验证我们的想法,我们使用了小干扰技术下调肿瘤细胞内的PTEN蛋白,证明了FH NPs通过调节PTEN蛋白抑制了由低剂量吉西他滨诱导的促肿瘤现象。同时我们发现低剂量的吉西他滨可以激活肿瘤细胞内质网应激,而高剂量的FH NPs可以明显下调由吉西他滨引起的内质网应激,提示FH NPs也可能通过抑制内质网应激促进肿瘤细胞对化疗药物的敏感。为了进一步验证我们的想法,我们使用高剂量吉西他滨治疗胆管癌细胞,并通过内质网激动剂衣霉素增加内质网应激。通过检测凋亡相关蛋白caspase-3和bax,观察细胞对化疗药物的敏感性。我们发现高剂量的吉西他滨可以促进细胞凋亡,使用衣霉素可以改善细胞凋亡。这反向证明FH NPs可以通过下调内质网应激来促进细胞对吉西他滨的敏感性。综上所述,本课题探讨了FH NPs治疗胆管癌的分子机制。我们发现FH NPs能够作用于肿瘤细胞微环境,抑制血管生成,EMT的发生发展和细胞干性,同时诱导细胞衰老,起到治疗胆管癌的作用。同时,FH NPs和吉西他滨联合使用,能够通过上调PTEN蛋白和抑制内质网应激,缓解由局部低剂量的吉西他滨诱导的促肿瘤作用,改善传统化疗药物的效果。我们的研究有望为今后进一步将纳米靶向药物应用到临床治疗中提供有力的理论依据。