【摘 要】
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基因组的精确复制对于细胞生命活动至关重要。在真核细胞中,DNA复制的起始受到严格而有序的调控。DNA复制起始即复制起始蛋白结合到基因组上特定序列从而起始DNA复制的过程。
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基因组的精确复制对于细胞生命活动至关重要。在真核细胞中,DNA复制的起始受到严格而有序的调控。DNA复制起始即复制起始蛋白结合到基因组上特定序列从而起始DNA复制的过程。真核生物的复制起始蛋白最初在芽殖酵母中发现,被称之为复制起始复合物(origin recognition complex,ORC),ORC在基因组上结合的特定序列被称之为复制子(replieator)。ORC在所有已经研究过的真核生物中都有同源蛋白,并且其生化功能也高度保守。不过,不同物种的DNA复制子的序列差异却很大。芽殖酵母的复制子ARS序列已经为人熟知,但还有很多物种的复制子研究尚不清楚。由于高等真核生物基因组的复杂性,以及缺乏酵母中可以用来分析潜在复制子的简便方法,高等真核生物中复制子的研究难度很大,也很费时。 在本研究中,我们利用DNA复制起始位点处新生的冈崎片段来定位复制起始源。通过提取新生冈崎片段构建文库并测序,我们获得了596个序列信息。随后,我们利用普通PCR,竞争性PCR和DNA琼脂糖二维凝胶电泳来验证这些序列是否是复制起始源,并获得了初步结果。由于大量断裂DNA的干扰和验证方法自身的缺陷,研究结果尚须进一步验证。
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