牛奶是重要的动物源性食品,同时也是人畜共患病的传染源。牛奶及奶制品很容易被病原微生物污染而危害人类健康,生鲜生奶在流通过程中可以传播多种疾病,例如布鲁菌病和李斯特菌病。布鲁菌是危害农场安全和人类健康的重要病原菌,感染布鲁菌的母牛在患病期间以及在流产后的很长时间内,仍可以通过乳汁排菌,产自病畜的牛奶是布鲁菌病由动物传播到人的重要传播媒介,食入含有布鲁菌的牛奶构成了公共卫生危害。单增李斯特菌是四大食源性致病菌之一,可以通过食物链导致人的感染。人感染单增李斯特菌的原因之一是由于食用了被污染的动物源性产品,牛奶和奶制品是两类传播李斯特菌病的重要途径,单增李斯特菌频繁的在奶牛场被检测到,对牛奶和奶制品安全构成了风险。因此,本研究通过建立牛奶中布鲁菌和单增李斯特菌的检测方法,围绕生鲜奶污染布鲁菌和单增李斯特菌的风险因素对奶牛场进行调查和解析,可以为我国制定牛奶安全保障措施提供科学依据。本试验获得了以下结果:(1)建立了生鲜牛奶中布鲁菌和单增李斯特菌的双重PCR检测方法,对污染模型乳用不同方式进行处理,布鲁菌和单增李斯特菌最低检测限分别为10 cfu/40mL和8 cfu/40mL。该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可单独或同时检测牛奶中布鲁菌和单增李斯特菌。(2)用已经建立好的检测方法检测采集的3739份生鲜牛奶样品,布鲁菌和单增李斯特菌的阳性率分别为0.29%和0.27%。试验结果为了解全国生鲜奶中布鲁菌和单增李斯特菌的污染状况提供了基础数据。(3)围绕生鲜牛奶污染布鲁菌和单增李斯特菌的风险因素对采样奶牛场进行调查,得到了在当前条件下我国奶牛场关于生鲜奶污染布鲁菌和单增李斯特菌风险因素相关的风险环节情况。(4)根据调查结果,对我国奶牛场的生鲜牛奶污染布鲁菌和单增李斯特菌的风险进行初步解析。当前,患布鲁菌病或有布鲁菌感染史的奶牛是生鲜牛奶污染布鲁菌的主要风险;较差的卫生条件和挤奶前处理不充分构成了生鲜奶污染单增李斯特菌的主要风险;不科学的储存方式加大了生鲜奶从环境中污染布鲁菌和单增李斯特菌以及单增李斯特菌在生鲜奶中增殖的风险。