沉默ATF5对卵巢癌细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响

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目的:探讨显性负抑制人转录激活因子5(Activating transcription factor5, ATF5)对卵巢癌细胞体外增殖、凋亡及顺铂敏感性的影响。方法:1.采用RT-PCR和Western-blot检测SKOV-3、A2780、OVCAR8卵巢癌细胞系中ATF5的表达情况,筛选出ATF5高表达细胞系。2.采用脂质体介导法将真核表达质粒pLeGFP-C1-NTAzip-ATF5和pLeGFP-C1分别转染SKOV-3细胞,同时设空白对照组。3.采用MTT及Annexin V/7-AAD双染法流式细胞术检测转染后不同时间点各组细胞的增殖活性变化及早期凋亡情况。4.采用MTT检测不同浓度的顺铂作用24h后上述三组细胞的增殖情况。5.采用流式细胞术检测4umol/L顺铂作用Oh、12h、24h、48h后各组细胞的凋亡。6.采用Western-blot检测显性负抑制ATF5联合顺铂作用后,下游基因bcl-2蛋白表达情况。结果:1.ATF5在SKOV-3细胞中的表达明显高于其它两株卵巢癌细胞,表达差异有统计学意义(P<0.05)。2.与空载体转染组及空白对照组相比,特异性转染组细胞生长明显受抑(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.05)。3.显性负抑制SKOV-3细胞内源性ATF5的功能联合顺铂作用后,与非特异性转染组和空白对照组相比,特异性转染组细胞增殖明显被抑制,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),抗凋亡基因bcl-2蛋白表达明显下降(P<0.05)。结论:显性负抑制ATF5的功能可抑制SKOV-3细胞的生长,促其凋亡,并增强其对顺铂的化疗敏感性;ATF5协同顺铂诱导细胞凋亡的机制可能与bcl-2的下调相关。
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