SAMHD1是一种细胞核蛋白，鼠γ干扰素诱导基因Mg11的类似物，具有脱氧核糖核苷三磷酸水解酶活性。SAMHD1能在树突状细胞和其他髓系细胞中阻碍人免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)的早期复制，而HIV-2和猴免疫缺陷病毒SIV编码的VPX可以对抗这种限制作用。这种特异性限制与对抗的作用是研究病毒入侵机理的重要发现。因此，研究SAMHD1的作用机制具有十分重要意义。单克隆抗体是研究蛋白功能的重要工具，本研究利用原核表达SAMHD1做为免疫原制备了高效分泌抗SAMHD1蛋白的特异性单克隆抗体，并进行了初步应用。本研究以受捐者单核细胞提取的RNA为模板，通过RT-PCR方法，扩增出SAMHD1基因，通过双酶切将其分别克隆至pcDNA3.1和pET30a载体中。通过对原核表达系统的优化，最终获得分子质量约79KDa、可溶性形式的重组蛋白SAMHD1，并采用镍柱对该蛋白进行纯化。Western blot检测结果表明，原核及真核重组蛋白SAMHD1分别与His和HA抗体发生特异性反应，表明SAMHD1基因在原核和真核表达系统中均获得正确表达。本研究利用原核表达并纯化的人SAMHD1蛋白为免疫原，经腹腔接种4周龄BALB/c小鼠，取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，获得了1株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株3C3。其抗体亚型为IgG2b/κ链。Western blot实验结果表明3C3MAb不仅可以识别pcDNA-huSAMHD1转染293T细胞后大量表达的外源性SAMHD1，也可以识别293T、THP-1细胞内源性表达的少量SAMHD1蛋白。此单抗不与猴、马SAMHD1的真核表达蛋白反应，且与未转染的马皮细胞、驴皮细胞、兔肾细胞均无反应。表明制备的3C3MAb仅具有识别人SAMHD1的特点，而与其他种属的SAMHD1无交叉反应，具有良好的种属特异性。该单抗可用于免疫荧光、 Western blot、ELISA等免疫学方法的检测。HD结构域是SAMHD1的主要功能区，为鉴别制备的3C3MAb针对的抗原表位是否也位于其HD区域，本实验成功构建了SAMHD1的两个功能区SAM、HD的原核表达质粒pET-SAMHD1-SAM和pET-SAMHD1-HD，分别将其转化至Rosetta(DE3)感受态细胞，进行IPTG诱导表达。两个重组蛋白的相对分子质量分别为26kDa和62kDa。Western blot结果表明3C3MAb只与SAMHD1的HD原核表达蛋白呈阳性反应，而与其SAM原核表达蛋白无反应，因此，3C3MAb针对的抗原表位位于HD区域内。