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目的：在扶正祛邪基本原则指导下，探讨益气扶正方联合榄香烯治疗胰腺癌可能机理。
方法：
1、对益气扶正方进行剂型改造，制成颗粒剂。采用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定益气扶正方冲剂中黄芪甲苷的含量。
2、采用中药血清药理学方法提取含益气扶正方药物血清和空白血清。
3、四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测益气扶正方药物血清联合榄香烯在体外抑制人胰腺癌细胞株Panc-1增殖作用。
4、采用乳酸脱氢酶比色(LDH)法测定益气扶正方药物血清联合榄香烯对人胰腺癌细胞株Panc-1细胞膜的损伤作用。
5、采用人胰腺癌细胞株SW1900建立裸鼠人胰腺癌异位移植瘤模型，建模后随机分为五组：生理盐水组(20ml/kg，灌胃，简称NS组)、5-氟尿嘧啶组(24mg/kg，腹腔注射，简称5-Fu组)、益气扶正方组(12.5g/kg，灌胃，简称YQFZF组)、榄香烯组(100mg/kg，腹腔注射，简称Elem组)、益气扶正方联合榄香烯组(益气扶正方：12.5g/kg，灌胃；榄香烯：100mg/kg，腹腔注射，简称YQFZF+Elem组)，各组给予相应药物。治疗六天后各组处死一半，观察治疗前后荷瘤裸鼠体重变化、瘤体大小变化并计算肿瘤生长抑制率，记录并比较各组中另一半平均生存期，和NS组比较计算生命延长率。
6、原位缺口末端标记法(TUNEL)检测各组裸鼠人胰腺癌异位移植瘤细胞凋亡。
7、免疫组织化学法测定各组裸鼠人胰腺癌异位移植瘤组织Survivin蛋白表达。
8、半定量逆转录-聚合酶链反应(SqRT-PCR)法测定各组裸鼠人胰腺癌异位移植瘤Survivin基因表达。
9、统计方法：用PEMS 3.1统计软件进行统计学分析。各组数据指标用X±S表示，方差齐性检验后，采用单因素多样本均数比较，均数间两两比较采用SNK-q检验(Student-Newman-Ketuls法)。生长抑制率与剂量之间的相关性采用直线相关分析。检验标准以P<0.05为差异有显著性。
结果：
1、益气扶正方进行剂型改造：最终制颗粒535g，每克颗粒冲剂相当于生药约3.7g。颗粒外观良好，吸潮性小，溶化性好。HPLC-ELSD法测得益气扶正方颗粒样品中黄芪甲苷含量为0.15mg/g。
2、提取含益气扶正方药物血清和空白血清各50ml。
3、MTT法示：体积分数5％、10％、15％和20％的含益气扶正方药物血清对人胰腺癌细胞株Panc-1的OD值分别为1.366±0.701、1.372±0.662、1.548±0.153和1.552±0.525，空白对照组OD值为1.435±0.172；10-120μg/ml浓度的榄香烯均可使人胰腺癌细胞株Panc-1生长受到抑制，并且随着浓度及时间的增加，抑制率也逐渐增加，72小时的半数抑制浓度(IC<,50>)约为38.80μg/ml；5％的益气扶正方药物血清联合40μg/ml的榄香烯在72小时对人胰腺癌细胞株．Panc-1的抑制率为46.887％±10.817％，经Q检验两者为协同增效关系。
4、体积分数5％益气扶正方组、40μg/ml榄香烯组、5％益气扶正方联合40μg/ml榄香烯组对人胰腺癌细胞株Panc-1的培养液中LDH值分别为59.83±10.84、73.08±9.94和63.17±9.78。三组分别与空白对照组(69.42±11.35) LDH值相比，均无显著性差异(P>0.05)。
5、成功建立裸鼠人胰腺癌异位移植瘤模型，成瘤率达96％。治疗后NS组、YQFZF组、YQFZF+Elem组荷瘤裸鼠体重较治疗前分别增加0.783±0.703 g、2.133±0.561 g和0.533±0.339 g，三组间两两比较无显著差异(P>0.05)；5-Fu组和Elem组体重分别下降3.350±1.719和2.833±1.208 g，与NS组、YQFZF组、YQFZF+Elem组相比有非常显著差异(P<0.01)。5-Fu组、YQFZF组、YQFZF+Elem组和Elem组抑瘤率为分别为75.185％、21.898％、80.873％和71.904％。5-Fu组、YQFZF+Elem组、Elem组三组间两两比较无显著性差异(P>0.05)；5-Fu组、YQFZF+Elem组、Elem组三组与YQFZF组有非常显著性差异(P<0.01)。与NS组相比较，5-Fu组、YQFZF组、YQFZF+Elem组和Elem组的生命延长率分别为：-34.44％、21.85％、8.61％和-31.13％。其中YQFZF组与YQFZF+Elem组相比无显著性差异(P>0.05)。
6、TUNEL法测得5-Fu组、YQFZF组、Elem组和YQFZF+Elem组的凋亡指数分别为34.59％±7.99％、28.55％±7.78％、28.55％±7.78％、35.04％±4.29％和44.36％±3.03％，与NS组(9.08％±6.93％)相比有非常显著性差异(P<0.01)。YQFZF+Elem组的凋亡指数最高，与其它各组相比有非常显著差异(P<0.01)。
7、免疫组化结果示NS组、5-Fu组、YQFZF组、Elem组和YQFZF+Elem组Survivin蛋白的阳性表达率分别为74.860％±6.903％、58.512％±6.040％、62.087％±5.523％、59.378％±7.113％和55.402％±5.901％。与Ns组相比较其余各组均非常显著降低了Survivin蛋白阳性表达(P<0.01)。YQFZF+Elem组与5-Fu组相比，YQFZF+Elem组与Elem组相比均有显著差异(P<0.05)，YQFZF+Elem组与YQFZF组有非常显著差异(P<0.01)。在反应强度上，5-Fu组、YQFZF组、Elem组和YQFZF+Elem组的净灰度值分别58.578±11.287、61.539±7.132、55.058±9.120和47.708±9.443，与NS组(67.256±8.695)比较有非常显著差异(P<0.01)；YQFZF+Elem治疗组肿瘤组织中癌细胞Survivin蛋白表达的净灰度值最低，与其他各组均有非常显著差异(P<0.01)：Elem组肿瘤组织中癌细胞Survivin蛋白表达的净灰度值与YQFZF组相比有非常显著差异(P<0.01)。
8、SqRT-PCR结果表明：5-Fu组、YQFZF组和Elem组的移植瘤Survivin mRNA表达水平分别为0.584±0.082、0.662±0.086和0.609±O.047，三组间两两比较差异无显著性(P>0.05)，三组与NS组(0.761±0.085)相比有显著差异(P<0.01)；YQFZF+Elem组的移植瘤Survivin mRNA表达水平分别为0.534±0.067，与YQFZF组相比有显著差异(P<0.05)；YQFZF+Elem组与NS组相比亦有显著差异(P<0.05)。
结论：
1、制备的益气扶正方颗粒冲剂一般质量检查及黄芪甲苷的含量均符合质量控制标准，达到了预期要求，为进一步研究益气扶正方与榄香烯联合运用的体内外实验奠定了良好的基础。
2、益气扶正方药物血清联合榄香烯对人胰腺癌细胞株Panc-1的抑制有协同增效作用。其机制可能以诱导细胞发生凋亡为主。
3、益气扶正方联合榄香烯不但可以增强抑制肿瘤效果，而且在增加体重和生存延长期方面均有一定的优势；益气扶正方联合榄香烯治疗胰腺癌的机理与其诱导细胞凋亡及下调凋亡抑制基因Survivin表达有关。