灯台叶(DTY)为夹竹桃科鸡骨常山属的乔木灯台树(Alstoniascholaris R.Br.)的干燥叶,主要含有生物碱、黄酮、三萜类等成分,性味甘、淡、平,具有清热解毒、消肿止痛、平喘止咳、截疟、发汗、健胃等作用。近年来,随着对其化学成分、药理活性等方面研究的逐步展开,发现其活性成分丰富,在抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗糖尿病和降血脂等方面显示出重要的潜在药用价值。本课题以灯台叶为研究对象,采用现代的提取分离技术对其活性组分进行提取分离,并结合体外人肺腺癌细胞A549、SPC-A-1细胞模型和体内Lewis肺癌移植瘤模型对其抗肺癌活性组分进行系统的筛选,并对活性组分的抗肺癌的作用机理和生物药剂学性质进行初步研究,促进灯台叶的进一步开发利用,为创制抗肺癌现代中药制剂提供科学依据。本论文首先分别对灯台叶的化学成分、药理作用方面的研究进展进行了文献综述,实验部分主要完成了以下研究:1.灯台叶成分系统预试及相应成分的含量测定本实验首先对灯台叶的成分进行了系统预试,建立了其中代表性成分的含量测定方法,并对其进行测定,为后续实验药材的选定提供依据。实验结果表明:灯台叶中明显存在的是生物碱、黄酮和三萜类成分,其中总生物碱含量为2.13%,总三萜含量为2.45%,鸭脚树叶碱、齐墩果酸和熊果酸的含量分别为0.085%、0.55%、1.80%。2.灯台叶不同溶剂提取物体外抗肺癌活性比较选择人肺腺癌细胞A549和SPC-A-1两种细胞模型,采用MTT法对灯台叶不同溶剂依次提取的部位和不同溶剂分别提取的部位活性进行了评价,结果都是85%乙醇提取的部位抗肺癌活性最好,对A549和SPC-A-1细胞的IC50分别为275.48、297.03 μg提取物·mL-1,小于药物抗肿瘤活性评价的国际标准500 μg提取物·mL-1,具有较好的抗肿瘤活性。因此选择85%乙醇作为灯台叶抗肺癌活性筛选的提取溶剂。3.灯台叶有效组分的体外抗肺癌活性筛选将灯台叶85%乙醇提取物上于大孔树脂柱,依次用水、10%乙醇、20%乙醇、30%乙醇、40%乙醇、50%乙醇、60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、95%乙醇进行梯度洗脱,得10个洗脱组分,别记为DTY-水组分、DTY-10%乙醇组分、DTY-20%乙醇组分、DTY-30%乙醇组分、DTY-40%乙醇组分、DTY-50%乙醇组分、DTY-60%乙醇组分、DTY-70%乙醇组分、DTY-80%乙醇组分、DTY-95%乙醇组分。将分离成]0个溶剂组分,采用MTT法用A549和SPC-A-1两种细胞模型对各组分进行系统的体外抗肿瘤活性筛选,结果DTY-50%乙醇组分、DTY-60%乙醇组分、DTY-70%乙醇组分、DTY-80%乙醇组分、DTY-95%乙醇组分5个组分对细胞抑制活性较好,5个组分对A549细胞的IC50分别为438.93、58.94、81.70、35.10、89.00μg提取物·mL-1,对 SPC-A-1 细胞的 IC50 分别为 492.34、61.33、87.65、35.51、95.04 μg提取物·mL-1。应用显色反应、薄层、UV、HPLC对各个组分进行成分分析,结果发现DTY-50%乙醇组分、DTY-60%乙醇组分主要含有生物碱类成分,其中活性较好的DTY-60%乙醇组分总生物碱的纯度为61.40%;DTY-70%乙醇组分、DTY-80%乙醇组分、DTY-95%组分主要含有三萜类成分,其中活性较好的DTY-80%乙醇组分总生物碱的纯度为86.67%,且各有效组分中的生物碱类、三萜类成分的含量与抗肺癌活性有较大的相关性。4.灯台叶抗肺癌活性组分大孔树脂的筛选及其制备针对生物碱和三萜类成分筛选了 HPD400A,NKA-9,D101,DA201,AB-8 5种类型的大孔树脂,结合两类成分静态和动态吸附、解吸附的结果,筛选出AB-8型大孔树脂为富集两类成分的最佳树脂。结合体外活性筛选和成分分析的结果,将85%乙醇灯台叶提取物上于AB-8大孔树脂吸附,先用40%乙醇洗去杂质,然后用60%乙醇洗脱,得到总生物碱组分,纯度为54.54%,最后用80%乙醇洗脱,得到总三萜组分,纯度为65.54%,为后续体内活性筛选提供实验样品。5.灯台叶活性组分及其配伍体内抗肺癌活性研究选用小鼠Lewis肺癌移植瘤模型,以环磷酰胺(20 mg/kg/d)为阳性对照,对总生物碱组分、总三萜组分及总生物碱+总三萜(等生药量组合配伍)组分的体内抗肺癌活性进行研究,阳性组的抑瘤率为68.00±8.89%,总生物碱组分、总三萜组分及总生物碱+总三萜组分高剂量组(15 g 生药·kg-1·d-1)抑瘤率分别为 45.33±9.78%、46.00±15.11%、51.11±12.00%。与环磷酰胺给药组相比,总生物碱组分、总三萜组分、总生物碱+总三萜组分高低剂量给药组的胸腺指数、脾指数、肝指数以及细胞因子TNF-a、IL-6都有显著性增加,说明总生物碱组分、总三萜组分都具有一定的增强小鼠免疫功能的作用,并具有协同作用。6.灯台叶抗肺癌活性组分的作用机理进行初步研究总生物碱组分(5 mg生药·mL-1)、总三萜组分(5 mg生药·mL-1)和总生物碱+总三萜组分(2.8 mg生药·mL-1)作用A549细胞48h后,流式检测不同组分对A549细胞凋亡和周期的影响,结果表明灯台叶总生物碱组分,总三萜组分和总生物碱+总三萜组分均可使A549细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡率分别为30.17%、32.22%、34.45%;总生物碱组分、总生物碱组分和总三萜组分及总生物碱+总三萜组分呈现明显的G2/M期阻断,G2/M阻断百分率分别为4.48%、8.28%、10.56%。说明总生物碱组分和总三萜组分对细胞周期的作用机制相同,且两组分间可能存在协同的抗肿瘤作用。7.灯台叶活性组分的生物药剂学性质的初步研究总生物碱和总三萜组分在pH 2.5～8.0缓冲液中的表观溶解度范围分别为69.49～238.64μg·mL-1、20.76～137.09μg·mL-1,说明两种组分都属于极微溶解或几乎不溶物质;总生物碱和总三萜在pH1.2～8.0范围内的油水分配系数log P分别在1.06～2.11和1.78～2.86之间,1ogP均在0～3之间,可以推测总生物碱和总三萜组分在体内肠吸收较好。应用大鼠在体肠灌流模型研究总生物碱中鸭脚树叶碱的肠吸收。鸭脚树叶碱在质量浓度为10～30 μmol·L-1的吸收参数均无显著性差异(P>0.05),显示鸭脚树叶碱的肠吸收不受自身浓度的影响,主要表现为被动扩散机制。总生物碱中鸭脚树叶碱Peff*值按十二指肠、结肠、空肠、回肠的顺序逐渐减小,分别为4.50±0.85、3.69±0.92、2.67±0.64、1.51±0.62。将总生物碱中的鸭脚树叶碱与单体鸭脚树叶碱在不同肠段的吸收参数进行两两比较,结果在各肠段总生物碱中鸭脚树叶碱的吸收比单体鸭脚树叶碱略好,但没有显著性差异(P>0.05)。