【摘 要】
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本论文以微生物所产丹参素转化酶为研究对象,主要研究了微生物发酵粗酶液的酶反应条件、酶的分离纯化、提纯酶的性质及酶反应特性。通过实验,确定了粗酶液的酶反应条件为:最
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本论文以微生物所产丹参素转化酶为研究对象,主要研究了微生物发酵粗酶液的酶反应条件、酶的分离纯化、提纯酶的性质及酶反应特性。通过实验,确定了粗酶液的酶反应条件为:最适底物浓度为2%;最适pH为5.0;最适反应时间为8h;最适反应温度为45℃。用DEAE-celluloseDE52阴离子交换柱对上述粗酶液进行分离纯化,提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳检测纯化度,得到了单带,并由SDS-PAGE确定提纯酶的分子量为60BKDa。对提纯酶的酶性质研究可知,丹参素转化酶的最适pH值为5.0;最适温度45℃;最适反应时间为8h;pH范围在3～7时酶活力稳定;温度范围在25℃～60℃时酶活力稳定;金属离子对酶活力的影响为:Fe3+、Cu2+、Ca2+对酶活力有抑制作用;Mg2+对酶活力有激活作用;Zn2+、K+、Na+对酶活力影响不大;酶反应的Vmax=7.246mmlo/L·h,Km=68.03mmol/L。提纯酶的酶反应特性为,此酶具有pNP-β-D-Gal、pNPR、pNPP酶活力;对pNP-a-D-GLc具有弱的水解活力;不具有pNP-β-D-GLc、pNP-α-D-Gal及α-淀粉酶活力。
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