分子伴侣(molecular chaperones)是一组从细菌到人广泛存在的蛋白质,非共价地与新生肽链和解折叠的蛋白质肽链结合,并帮助它们折叠和转运,通常不参与靶蛋白的生理功能。Lackner等人发现,宿主细胞的分子伴侣Jiv90蛋白与CSFV具有自身蛋白酶活性的NS2蛋白相互作用,然后把NS2-3蛋白复合体切割成NS2和NS3蛋白单体。虽然对Jiv90基因的研究有一些报道但只是局限于与病毒的相互作用和对病毒滴度的影响,对Jiv90蛋白的功能研究鲜有报道。本文以揭示Jiv90蛋白的功能为目标,开展了Jiv90基因的原核表达、Jiv90蛋白的降解特性、Jiv90基因的细胞组织分布情况等方面的研究,取得了如下的研究结果。(1)根据Gene Bank上已发表的牛的Jiv90基因序列,设计特异的引物,应用RT-PCR技术扩增猪的Jiv90基因,将其定向插入到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Jiv90,Western-blot分析,经IPTG诱导后在大肠埃希菌中成功表达了分子质量约45ku的重组蛋白。(2) Jiv90基因与绿色荧光蛋白报告基因进行融合表达,Western blot分析发现Jiv90的融合蛋白的分子质量约为52 ku,该蛋白通过蛋白酶体途径降解,这一降解过程可以被特异性的蛋白酶体抑制剂MG132所抑制。(3)通过Real-Time PCR成功地获得了Jiv90基因在细胞和组织中的分布情况,在猪血管内皮细胞和猪肾细胞分布较高;在肺中的分布高于其他组织。