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目的评价益气清湿化瘀综合疗法治疗气虚血瘀夹湿型盆腔炎性疾病反复发作(recurrent pelvic inflammatory disease,RPID)的临床疗效,并探讨其调控Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)、Toll样受体9(Toll-like receptor 9,TLR9)、人髓样分化因子88(myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)表达的相关免疫机制。方法在2017年8月-2018年5月内,共筛选纳入符合RPID诊断的30例患者作为试验组,均来源于此时间段内于成都中医药大学附属医院妇科门诊就诊患者,选择同期健康志愿者10例作为对照组。试验组予以“益气清湿化瘀综合疗法”,即口服中药(盆炎康复汤)、直肠给药(妇科灌肠液)以及艾灸治疗(中脘、神阙、关元、双侧足三里),总共治疗3个月。根据试验组复诊情况,每4周对其临床证候表现、盆腔体征、盆腔疼痛进行计量评分,12周治疗疗程结束后,对比观察试验组治疗前后证候、体征及盆腔疼痛评分情况并评估临床疗效。停药后随访3月,观察并评估其复发情况。而健康对照组则不予任何干预。分别于试验组、健康对照组两组入组时以及试验组治疗疗程结束时两个时间段采集非经期空腹肘静脉血液进行以下检测,包括:(1)流式细胞术检测外周血淋巴及单核细胞中TLR7、9的蛋白表达水平;(2)逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测外周血单核细胞中TLR7、TLR9mRNA的表达水平;(3)以酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清MyD88表达水平;(4)以化学发光法(ChemiLuminescence,CL)检测血清IL-6表达水平。在试验组中选取12例进行安全性评价。结果1.临床观察结果:1.1单项症状、体征疗效:下腹、腰骶部疼痛或坠痛、劳累后或经行前后加重,带下过多、色白或黄,体倦乏力,行经时间延长或月经量多,经血淡暗或有块,脘闷纳呆,口腻;子宫压痛固定,一侧或双侧附件增厚或压痛以及宫骶韧带增粗触痛等单项指标疗效治疗前后比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。1.2止痛疗效:通过本研究方案治疗后,试验组愈显率为70%(痊愈率33.3%、显效率36.7%),有效率为30%,总有效率为100%,并且将试验组治疗前后的盆腔疼痛评分进行比较,结果显示治疗前盆腔疼痛评分为5.00±1.02,治疗后为1.33±0.96,较治疗前下降3.90±1.48,差异有显著统计学意义(P<0.01)。1.3体征疗效:通过本研究方案治疗后,试验组愈显率为70%(痊愈率6.67%、显效率63.33%),有效率为26.67%,总有效率为96.67%,并且将试验组治疗前后的体征疗效总评分进行比较,结果显示治疗前体征疗效总评分为8.73±1.60,治疗后为2.20±1.06,较治疗前下降6.76±1.84,差异有显著统计学意义(P<0.01)。1.4中医证候疗效:通过本研究方案治疗后,试验组愈显率为76.67%(痊愈率0%、显效率76.67%),有效率为20%,总有效率为96.67%,并且将试验组治疗前后的证候疗效总评分进行比较,结果显示治疗前证候疗效总评分为17.33±2.59,治疗后为4.60±1.67,较治疗前下降13.62±2.50,差异有显著统计学意义(P<0.01)。1.5试验组安全性评价:本试验研究过程中共发生1例研究相关的轻度不良反应,未发生严重不良事件。实验室检查均未见明显异常。1.6复发率:治疗期间无受试者发生PID复发情况,治疗结束后对患者随访至12周,受试者发生PID再复发1例,复发率为3.33%。2.实验室指标检测结果:2.1 TLR7、TLR9蛋白表达指标:将试验组和健康对照组两组治疗前外周血淋巴细胞及单核细胞中TLR7、TLR9蛋白阳性表达率进行组间比较,结果显示前者差异有统计学意义(P<0.05),而TLR9在试验组中表达率虽增高,但与健康对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);将试验组治疗前后TLR7、TLR9蛋白阳性表达率进行自身对照比较,结果显示治疗后二者表达率均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.2 TLR7、TLR9mRNA基因表达指标:将试验组和健康对照组两组治疗前外周血单核细胞中TLR7、TLR9mRNA表达水平组间比较,结果显示治疗前水平均高于对照组,其中TLR7mRNA差异有统计学意义(P<0.05),而TLR9mRNA差异无统计学意义(P>0.05);将试验组治疗前后TLR7、TLR9mRNA表达水平进行自身对照比较,结果显示治疗后二者表达水平均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.3细胞因子指标:将试验组和健康对照组两组治疗前外周血清中MyD88及IL-6的表达水平进行组间比较,结果显示试验组均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);将试验组治疗前后外周血清中MyD88及IL-6的表达水平进行自身对照比较,结果显示治疗后二者表达水平均低于治疗前,差异均有统计学意义(P<0.05)。2.4相关性分析:根据检测结果显示,试验组外周血单核细胞中TLR7与TLR9蛋白表达呈正相关关系,相关系数=0.878,相关性有统计学意义(P<0.01);此二者同样与TLR7mRNA的表达呈正相关关系,相关系数分别=0.547,0.457,相关性有统计学意义(P<0.05),且前者相关性较后者显著(P<0.01);而其余指标之间相关性均无统计学意义(P>0.05)。结论1.益气清湿化瘀法综合方案治疗RPID(气虚血瘀夹湿证)在缓解盆腔体征及中医证候、改善盆腔疼痛方面有一定的治疗优势,随访3月复发率低,且治疗过程中无明显不良反应。2.盆腔炎性疾病反复发作可能与TLRs/MyD88正向免疫通路相关分子(TLR7、TLR9、MyD88)及炎性因子(IL-6)等各指标不同程度的异常表达及其机体免疫稳态失衡有关。3.益气清湿化瘀综合方案治疗RPID的免疫机制可能在于通过下调TLR7、TLR9及TLR7、9mRNA、MyD88及IL-6的表达水平,进而抑制下游炎性因子释放,减轻炎症反应,从而改善免疫功能,发挥防治RPID的作用。