本研究采用实验室前期获得的新疆荒漠甲虫光滑鳖甲Anatolica polita抗冻蛋白基因ApAFP914，构建不同的原核表达质粒，获得了具有不同标签的重组光滑鳖甲抗冻蛋白 ApAFPs。以 ApAFP914作为蓝本，通过定点突变技术获得了ApAFP914-A19T、ApAFP914-T33F和ApAFP914-T33&45F三个突变体基因。经ExPAsy的Swiss Model生物信息学软件预测野生型与突变体蛋白的高级结构，结果表明带有突变位点的基因在空间结构上变化并不大，位点的改变并没有影响蛋白质的结构。　　将构建好的pET32a-ApAFP914及其突变体在E. coliBL21(DE3)菌株中高效表达可溶性的融合蛋白TrxA-ApAFP914，Ni-NTA亲和层析纯化后纯度达到95％以上，SDS-PAGE检测其分子量约为30 kDa，Western Blot检测具有活性。　　采用差示扫描量热仪（DSC）分析重组ApAFP914及其突变体的量热学特性并对其热滞活性（THA）进行了测定。ApAFP914s的THA测定值与溶液中冰核含量有关。当ApAFP914s溶液冰核含量小于25%时，能够观察到明显的重结晶延滞现象，即当温度降到熔点温度以下溶液才开始结冰，表明ApAFP914s具有热滞效应。当溶液冰核含量小于5%时，ApAFP914的THA可达到0.49℃，而ApAFP914-A19T则高达0.55℃，ApAFP914-T33F降低为0.38℃，ApAFP914-T33&45F的0.31℃则更低。ApAFP914s的THA随蛋白浓度的增加而变大，具有明显的浓度效应。通过比较热滞活性（THA）3种突变体和ApAFP914，顺序是ApAFP914-A19T> ApAFP914> ApAFP914-T33F＞ApAFP914-T33&45F。　　ApAFPs对菌体的体外低温保护实验结果表明，ApAFP914可明显提高大肠杆菌和酵母菌在低温下的存活率，且具有明显的时间效应和浓度效应。相同摩尔浓度下， ApAFP914及其突变体对菌体的保护效果顺序是 ApAFP914-A19T≈ApAFP914> ApAFP914-T33F≈ApAFP914-T33&45F。　　ApAFP914也可显著降低4℃、-4℃或-7℃低温条件下红细胞的溶血率。初步推测ApAFP914通过与冰核吸附结合阻止冰晶的生长，同时与红细胞膜结合保护膜完整性而发挥低温保护作用。　　用DSC法测定了盐溶液NaCl、LiCl、CaCl2、MgCl2及多羟基醇类物质山梨醇、海藻糖对重组光滑鳖甲抗冻蛋白ApAFP914热滞活性的影响。发现盐离子可明显依数性地增加重组ApAFP914的热滞活性，且二价盐离子溶液的增效作用大于一价盐离子，在低浓度条件下尤为明显。两种多羟基物质的增效作用小于盐离子作用，需在高浓度下才表现出明显的增效作用。　　本研究还探究了 ApAFP914作为外源添加剂对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻的影响。通过形态观察及FDA、PI双染色技术统计添加ApAFP914后小鼠卵母细胞玻璃化冷冻后的存活率。结果发现ApAFP914处理组卵母细胞的存活率显著高于对照组，说明ApAFP914可考虑作为卵母细胞玻璃化冷冻添加剂使用。