NKEF(Natural Killer Enhancing Factor,自然杀伤增强因子)-A/B是一类Peroxiredoxin(Prxs)家族抗氧化蛋白,最初在酵母中发现,因其能提高NK细胞杀伤毒性而得名。此外,NKEF还参与了炎症调节,癌症发生与发展以及氧化还原反应等过程。NCC(Nonspecific Cytotoxic Cell,非特异性细胞毒性细胞)是哺乳类NK细胞的前体细胞,在鱼类先天性免疫中发挥重要作用。然而NKEF在罗非鱼NCC活性调控中的作用尚不清楚。本研究对罗非鱼nkef基因进行了鉴定与功能分析,并取得以下结果:1、通过RACE技术得到罗非鱼nkef(On-NKEF)基因全长共1274 bp,其中5’-UTR为57 bp,3’-UTR为620 bp,ORF为597 bp,编码198个氨基酸。经网站预测,该蛋白分子量大小为22.085 kDa,理论等电点大小为6.51,包含一个Typical 2-Cys Prx家族结构域,在第51和172位分别是两个有活性的半胱氨酸位点。该蛋白在哺乳类、鸟类、两栖类及鱼类中十分保守,同源性在80%以上。系统进化分析可知与斑马拟丽鱼(Maylandia zebra)亲缘关系最近。2、On-NKEF在罗非鱼各探究组织器官中均有分布,在头肾全淋巴细胞及NCC中相对表达量最高,组织中则鳃和脾脏中表达量最高,皮肤表达量最低。当无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)刺激鱼体后,头肾、脾脏、鳃、皮肤均显著性上调。分离头肾NCC进行细胞培养并予无乳链球菌、LPS、poly(I:C)刺激,发现24h时间点均显著上调。将重组质粒转染细胞后于激光共聚焦显微镜下观察发现,该蛋白在细胞质中呈点状分布。3、通过转染发现该基因可引起细胞增殖并显著性抑制NF-κB通路,On-NKEF重组蛋白,可促进B细胞、巨噬细胞及NCC增殖,并能诱导NCC效应分子perforin-1,granzyme,FasL,TNFα,lymphotoxinα,FADD及CAS的表达,由此推测On-NKEF可通过上调效应分子表达来增强NCC杀伤活性。以上结果为进一步探究鱼类抗菌免疫及非特异性免疫细胞调控的机理提供新的思路和理论支撑。